Онлайн ирга: Игры на 2 игрока 👬 · Играть онлайн бесплатно
Игры на 2 игрока 👬 · Играть онлайн бесплатно
Многопользовательские онлайн игры
Надоело играть против компьютера? Играйте с живыми людьми — играйте в MMO-игры!
- Вар Тандер Экшен На русском
- Forge of Empires Стратегии На русском
- World of Tanks Экшен На русском
- World of Warships: Корабли Экшен На русском
- Рыцарь дракона 2 RPG На русском
- Элвенар Стратегии На русском
- Тотал Батл Стратегии На русском
- Моя маленькая ферма Стратегии На русском
- Фортнайт Экшен На русском
- Рейд: Шедоу Легендс RPG На русском
- Enlisted Шутеры На русском
- Рыцарь дракона RPG На русском
- Варфейс Шутеры На русском
- Игра престолов Стратегии На русском
Показать все игры
Игры · Гонки 🚘 · Играть онлайн бесплатно
Многопользовательские онлайн игры
Надоело играть против компьютера? Играйте с живыми людьми — играйте в MMO-игры!
- Вар Тандер Экшен На русском
- Forge of Empires Стратегии На русском
- World of Tanks Экшен На русском
- World of Warships: Корабли Экшен На русском
- Рыцарь дракона 2 RPG На русском
- Элвенар Стратегии На русском
- Тотал Батл Стратегии На русском
- Моя маленькая ферма Стратегии На русском
- Фортнайт Экшен На русском
- Рейд: Шедоу Легендс RPG На русском
- Enlisted Шутеры На русском
- Рыцарь дракона RPG На русском
- Варфейс Шутеры На русском
- Игра престолов Стратегии На русском
Показать все игры
Игры больница – играть онлайн бесплатно!
Чтобы стать врачом, нужно очень много учиться, и начинать надо не в институте, а с самых юных лет! Игры больница для девочек позволят юному будущему доктору не только прочувствовать всю тяжесть и ответственность врачебной профессии, но и научат чему-то новому. Неспроста игры больница интересны не только детям, но и взрослым! Ведь только игры больница для девочек позволяют проводить сложные операции. А еще они приоткрывают завесу тайны над тем, что происходит за закрытыми дверьми кабинетов медучреждения. Помимо этого, они развивают координацию и позволяют с интересом провести свободное время!
Мир не стоит на месте, и медицина, как и все остальные отрасли науки, развивается семимильными шагами. В старину древние эскулапы могли довольствоваться подорожником, а сегодня прогресс требует проведения сложных операций с привлечением непростого в управлении оборудования! Помимо этого, появилось ещё множество различных методов и средств диагностики, которыми тоже непросто овладеть. Однако затраченные на изучение усилия окупаются с лихвой, ведь и диагнозы теперь ставятся гораздо раньше и точнее, и лечение становится более эффективным.
Игры для девочек больница демонстрируют использование во врачебной практике самых новейших средств терапии и диагностики, а потому послужат отличной подготовкой для того, кто в серьёз хочет заниматься медициной и мечтает работать в современном медучреждении. Конечно, они не дадут профессиональных знаний, а потому почерпнутые из игры сведения не стоит использовать на практике (то есть, дома с котом или младшей сестрой экспериментировать и проводить операции точно нельзя)! Однако они позволяют взглянуть на профессию современного врача изнутри и понять: действительно ли желание стать доктором так сильно, или лучше попробовать себя в другой профессии?
Приходи ко мне лечиться и корова, и волчица…
Далеко не во всех играх больница пациентами служат люди. Иногда игроку предстоит перевоплотиться в ветеринарного врача и оказывать первую помощь, а также производить и более серьёзное лечение животным. И неважно, идёт речь о собачках и кошечках или поросятах и телятах: работа ветеринарного врача имеет свою специфику по сравнению с трудом обычного, «человеческого» доктора!
Лечение животных – тоже сложная задача. Ведь человеку куда проще переносить неприятное медицинское воздействие: даже ребёнку, в конце концов, можно объяснить, что «обижают» его не просто так, что «тётя доктор» всего лишь хочет ему помочь. В обращении же с животными словами объяснить нельзя ничего – именно поэтому от врача требуется максимальное терпение и даже нежность по отношению к больному зверёнку.
Искусство управлять
Среди игр про больницы есть немало таких, где игрок исполняет роль не врача, а администратора. И, надо сказать, эта роль ничуть не менее важна для медицинского центра! Прежде чем больной сможет попасть к нужному ему врачу, он приходит в регистратуру. Администратор должен вежливо встретить посетителя, внимательно выслушать и корректно направить к необходимому специалисту – и всё это нужно проделать быстро, чтобы не заставлять остальных больных долго ждать в очереди!
Для этого администратор должен сам отлично ориентироваться в медицинских услугах, которые оказывает его больница и быстро соображать, куда же нужно отправить пациента. Больные люди, как правило, практически беспомощны: они плохо себя чувствуют, а потому совсем не хотят вникать в особенности внутреннего устройства больницы. Из-за этого администратору приходится провожать их в нужные кабинеты, и ещё и следить за тем, чтобы нигде не копились очереди!
Игры для девочек больница позволяют ребёнку морально подготовиться к будущей нелёгкой профессии врача, знакомя с особенностями современно медицины и даже давая возможность узнать что-то новое о строении человеческого тела. Игры больница содержат только проверенные медицинские факты, а потому можно быть уверенным, что почерпнутая из них информация не окажется ложной!
Комментарий психолога
Игра в больницу, возникающая в дошкольном возрасте, связана с потребностью ребенка включиться в общественную жизнь, принять участие в трудовой деятельности (Смирнова, 2017). В детской педагогике игра в больницу рассматривается как средство развития личности дошкольника, как способ познания общественных отношений (Белоусова, 2014; Ильинова, 2014). Девочки более склонны играть в больницу, чем мальчики, что может быть связано со спецификой полоролевого воспитания (Самсоненко, Загайнова, 2015; Тропынина, 2017). В детской медицине компьютерные игры используются с 1980-х гг. для снятия боли, снижения тревожности, повышения мотивации пациента сотрудничать с врачом (Kato, 2010). С 2000-х гг. компьютерные игры на больничную тематику становятся инструментом медицинского образования и просвещения (т.н. games for health) (Ferrara, 2013; Garrell, 2015). Показано, что игры в доступной форме позволяют усвоить базовые медицинские знания, стимулируют к ведению здорового образа жизни (Lieberman, 1997; Baranowski et. al. 2016). К ограничениям игр о больнице можно отнести реалистичное изображение тяжелых заболеваний и хирургических операций: необходимое с точки зрения медицинского просвещения, оно может вызвать тревогу у детей дошкольного и младшего школьного возраста.
Ирга канадская в Экспозиции экосистем
Ирга канадская является представителем флоры Северной Америки. В экосистемах посажена как наиболее декоративный вид рядом с другими растениями, естественный ареал которых расположен на этом континенте. В природе встречается по берегам рек и болот, иногда на склонах высоких скал. Морозоустойчива, не болеет, хорошо переносит городскую среду.
Это крупный многоствольный кустарник высотой до 6 метров, реже дерево — 8–10 метров. В молодости имеет вертикальную рыхлую крону, которая с возрастом разрастается в ширину, приобретая зонтиковидную форму со слегка поникающими боковыми побегами. Листья яйцевидные, при распускании имеют пурпурный оттенок, затем становятся зелеными с сизоватой нижней стороной, а осенью раскрашиваются в оттенки от оранжевых до темно-пурпурных. В апреле-мае, до распускания листвы, на 7–10 дней ирга покрывается белыми кистевидными соцветиями. В августе появляются сине-черные плоды, красиво выделяющиеся на фоне листвы.
Amelanchier canadensis (or serviceberry) is a North American species of flora. It is planted in ecosystems as the most ornamental species alongside other plants from similar North American habitats. It occurs in nature along rivers banks and swamp shores, and sometimes on the slopes of high cliffs. It is frost-proof, resistant to disease, and highly tolerant of urban environments.
It is a massive multi-stem shrub that grows up to 6 m in height. Less often, it may look like a tree that is 8–10 m tall. A young tree has a loose vertical crown which grows wider with age, taking on an umbrella-like shape with slightly drooping side shoots. The leaves are egg-shaped. During frondescence, they have a purple tint and later turn green with a bluish underside. In autumn, their colours vary from orange to dark purple. In April and May, before the foliage expands, serviceberry is covered with white racemes for 7–10 days. In August bluish-black fruits appear in beautifully contrast against the foliage.
加拿大唐棣是北美植物群的代表。在生态系统中其他分布在北美大陆的物种中,是最具观赏性的一种。在自然界中,它见于河流和沼泽岸边,有时在高耸悬崖的山坡上。加拿大唐棣抗霜冻、不患病,能很好适应城市环境。
这是一种高达6米的大型多干灌木,也有少数高达8-10米。幼树具有垂直松散的冠状,随年龄增长而变宽,呈伞状,侧枝微垂。叶子呈椭圆形,开花时叶片呈紫色,然后变成绿色,底部带蓝色,秋天则呈现橙色至深紫色的色调。4月至5月,在叶子发芽之前,持续7-10天,唐棣上出现白色总状花序。八月结出蓝黑色的果实,在树叶的映衬下格外美丽。
Игры Для подростков, играть онлайн бесплатно
Если в городе объявляют комендантский час, то не стоит выезжать на дорогу. Но главная героиня игры, кажется, забыла об этом. На немыслимой скорости она гонит домой на своем внедорожнике. Управлять этим автомобилем придется вам. Но будьте осторожны! Следите за светофорами на дороге, а также за проезжающими мимо машинами. Для того чтобы не попасться на глаза какому-нибудь полицейскому, вам необходимо гнать изо всех сил. Поэтому наезжайте на проезжающие мимо машины, если они стоят у вас на пути. Помните о том, что малейшее промедление грозит вам арестом. Но будьте аккуратны. Если ваш внедорожник перевернется, у вас не будет шанса стать на колеса. В этом случае вам придется закончить игру. Остерегайтесь полисменов. Самые бдительные из них патрулируют ночную улицу и выискивают таких злостных нарушителей правопорядка, как вы.
Куда только не заносит жажда приключений улитку Боба! На этот раз маленькое создание оказалось в космосе. Причем, миссия, которую ему предстоит выполнить, весьма важная. Он не справится без помощи мальчиков и девочек. Помогите Бобу преодолеть все препятствия, чтобы уверенно продвигаться из уровня в уровень. Ему и так придется не сладко: улитке необходимо преодолеть гравитацию. Кликайте на кнопку, которая отправит Боба высоко вверх, а затем опускайте его на землю с помощью этой же кнопки.
Представьте себе апокалипсис, причиной которого стали мутировавшие мухи. Эти наглые насекомые сметают все на своем пути. Спасти мир сможет только маленький лягушонок. Вам предстоит сыграть вместо него. Данная игра является довольно интересной, поскольку в ней вам придется собрать пазл довольно необычным образом. Хватайтесь языком за доступные вам поверхности и притягивайте их к себе. Тем же языком вы можете отлавливать назойливых мух. Спасите мир, пока в нем не наступил хаос.
В игре «Найди отличия Алиса в стране чудес» вы увидите множество фотографий с изображением Алисы, ее волшебного мира и ее друзей. На первый взгляд вам может показаться, что две предложенные картинки похожи. Но если вы присмотритесь, то поймете, что между ними есть некоторые отличия. Попробуйте отыскать их. Обращайте внимание даже на самые мелкие детали, чтобы поскорее отыскать все отличия. Чем быстрее вы с этим справитесь, тем скорее сможете перейти к следующему уровню, в котором вас ждет очередное изображение с путешествия Алисы.
✌ Игры онлайн на 146% бесплатно
Декабрь 2018
Приветствуем всех маленьких и больших любителей игр! Наступает новый год, а значит у нас есть приятные подарки для вас. В их число входит коллекция новогодних игр про Санта-Клауса, Деда Мороза и Снегурочку. Надеемся всем придется по душе кидание снежками и катание на санях в новогодние праздники, которые для детей всегда были настоящими каникулами, ну а для взрослых превратились в полноценный отпуск.
Ноябрь 2017
Заметив опускание лучших флеш игр в глубины сайта, мы решили помочь вам играть в старые забытые, но популярные через показ новой панели. Она доступна не на всех мониторах, а только начиная с разрешения 1280px, чтобы не отвлекать владельцев маленьких экранов на текущей странице. В зависимости от жанров текущей игры мы показываем различные подборки, поэтому они отличаются на разных страницах.
А также наши давние и внимательные посетители заметили изменения основного и дополнительного меню. Всё это направлено на повышения удобства использования сайта заядлыми игроками. Мы стараемся делать его лучше (хотя тут кто-то справедливо замечает — уберите рекламу и будет хорошо) — мы на это отвечаем примерно так: кушать охота всем и дабы сохранить весь контент бесплатным для использования, поставьте себе AdBlock и проблем не будет. Это стандартный плагин, вырезающий рекламу внутри игр и на страницах игровых сайтов.
Июнь 2017
Как и предполагалось, крутые и топовые игры не всегда подсовывались наверх. Разобрав все и заново собрав, наша команда нашла способ подсовывать самые-самые классные флешки наверх. Надеюсь Вы оцените рейтинги, которые строятся при Вашем активном участии и получаемый контент даст фору конкурентам 🙂
Дорогие друзья. Мы решили сделать новую сортировку для поиска игр, называется она Залипание. Мы находим и показываем игрушки, на которых вы чаще всего залипаете. Включили — и давай играть нон-стопом. Т.к. все считают популярность, новизну — то-се, то мы решили порадовать вас еще одним фильтром, по которому будут находится игры, отнимающие много времени. Будьте аккуратны, ведь начиная играть в них вы сможете пропустить такую отличную погоду на улице :).
Учитывая блокировку флеш плагина хромом и другими браузерами, мы, во-первых, отключили рекламу перед загрузкой игры (это был флеш ролик), а во-вторых — решили добавлять больше HTML5. HTML5 — универсальные и работают независимо от платформы, на которой вы их открываете (ПК, Мак, андроид смартфон, айфон, айпад и т.д.) Также стали убирать с сайта все на движке UNITY3D, т.к. поддержка этого плагина в скором времени также станет ограниченной (об этом заявила компания гугл) и unity3d игры часто вешают ваш браузер, что приводит к тому, что вы уходите с нашего распрекрасного сайта в другие места 🙂
Февраль 2017
В феврале 2017 года обновился алгоритм подсчета тематических и популярных игр (по которым строятся листинги в разделах). Решили сделать подсчет популярности каждой игры не по количеству ёё просмотров, а по продолжительности — это позволило выявить действительно популярные флешки, на которых вы по долгу зависаете.
Что качается игр в тему — то тут пришлось совместить несколько математических моделей для отображения действительно тематических флешек. Т.е. если раньше под каждой игрой вы видели преимущественно топовые (и они зачастую были везде одинаковые), то теперь они показываются более разнообразно и правильно (на наш взгляд).
Январь 2017
С января 2017 добавили на сайт новое меню с большим количеством героев. Кому-то такой вариант раздвижного меню может показаться неудобным, но уверяю — это дело привычки. С большим меню стало удобнее тыкать на игровой жанр. И жанры мы постарались отсортировать максимально приближенно к предпочтениям наших посетителей. Добавили новые разделы — майнкрафт и трансформеры, уж не знаю, почему они пользуются такой бешеной популярностью 🙂
Июль 2016
С июля 2016 года мы добавили возможность играть в загружаемые в iframe (они находятся на сайтах разработчиков) в отдельном окне. Это позволит во-первых увеличить размер в видимой части экрана, во-вторых — отсутствие рекламы и прочего мусора. Зачастую флешка, открытая в отдельном окне работает быстрее, чем загружаемая в стандартной странице (за счет отсутствия рекламы и прочих элементов страницы).
Если Вы ищете сайт, где собраны самые лучшие и интересные флеш игры для взрослых и детей, тогда вы нашли его, ведь на Game01 вы сможете поиграть во все что угодно!
Удобный интерфейс и флеш на любой вкус
Вы можете выбрать любую забаву из представленных на сайте благодаря удобной панели навигации. Достаточно выбрать подходящий раздел и нажать в нем на понравившуюся иконку. Всего два клика — и вы наслаждаетесь игрой совершенно бесплатно!
Наш сайт всегда доступен благодаря надежному серверу с хорошим каналом, так что вы можете быть тут в любое время суток без каких-либо ограничений. Перечень игр ежедневно пополняется, так что советуем вам внести Game01 в закладки, чтобы быть в курсе последних обновлений и в числе первых оценить тщательно отобранные нами игровые новинки.
Развивайтесь, развлекаясь!
В игре каждый человек усваивает определенную информацию. Стратегии, головоломки, логические игры, платформеры — все эти и многие другие жанры развивают логику, пространственное мышление, воображение и тренируют координацию движений.
Поэтому неправы те родители, которые не позволяют своим детям играть онлайн. Главное — подобрать хорошие игры, и вы смело можете запускать любой вариант из предложенных на нашем сайте, потому что у нас плохих игр не бывает!
Самые захватывающие игры для мальчиков
Если вы любите захватывающие истории и умопомрачительные приключения, то специально для вас подобраны игры таких категорий, как «Стрелялки», «Зомби», «Шутеры», «Машины», «Война», «Драки» и многих других. Также вам наверняка понравятся спортивные симуляторы из разделов «Гонки», «Хоккей» и «Футбол», ведь ни один мальчик не смыслит своей жизни без духа соревнования или быстрых автомобилей.
Также вы можете получить удовольствие от новых приключений различных героев, таких как Бэтмен, Бен 10, Наруто, Человек-паук. Почувствуйте себя в роли любимого супергероя или мультипликационного персонажа и преодолейте любые препятствия на своем пути!
Самые красивые, романтичные и интересные игры для девочек
Если вы любите моделировать уникальные наряды или готовить вкусную и красивую еду, то вам понравятся игры таких категорий, как «Еда», «Макияж», «Одевалки» и «Украшение вещей». Проявляйте фантазию и изысканный вкус, создавая красивые вещи и демонстрируя их подругам!
Кроме того, вы можете принять активное участие в приключениях персонажей из любимых мультфильмов, таких как «Винкс», «Монстр Хай», «Барби» и многих других. Игровые истории разных жанров не дадут вам заскучать, достаточно просто начать!
Играть интересно и взрослым, и детям
Считаете, что онлайн флеш-игры предназначены только для детей, то ошибаетесь. Среди них есть множество интересных вариантов, геймплей которых действительно затягивает!
Например, та же «Ферма», популярная в социальных сетях, представлена на нашем сайте в различных вариантах, среди которых вы обязательно найдете привлекательный для себя. Что уж говорить о различных гонках, файтингах, платформерах и стрелялках, в которые можно сражаться как в одиночку, так и вместе с другом.
То же касается и различных логических игр, головоломок и стратегий. Под внешней легкомысленностью некоторых из них кроется серьезный вызов вашей эрудиции, логике и пространственному мышлению. Так продемонстрируйте же окружающим, насколько хорошо вы умеете играть!
Лучшие игры на Game01!
У нас вы можете поиграть совершенно бесплатно и без регистрации. Но мы все же советуем вам авторизоваться при помощи своего аккаунта в Одноклассниках, Mail.ru, Facebook или ВКонтакте. Всего пара кликов, и вы получаете множество привилегий по сравнению с пользователями, не прошедшими авторизацию. Например, вы сможете наслаждаться любимыми играми без рекламы, а также участвовать в ежемесячном конкурсе игроков с денежными призами.
Проводите время весело и с пользой на Game01, ведь мы ежедневно радуем вас лучшими новинками игровой индустрии!
Играйте бесплатно в игры на ourgames.ru
Приветствуем вас! Добро пожаловать на Ourgames.ru!
Здесь вы найдете тысячи онлайн-игр, в которые можно играть как в одиночку, так и в режиме сетевой игры. У многих игр есть мобильные версии. Попробуйте запустить их на своем ноутбуке, смартфоне или планшете. Любой игрок вне зависимости от возраста найдет здесь для себя что-нибудь интересное!
Без скачивания и регистрации. Просто нажимайте и играйте!
Окунитесь в водоворот эмоций от любимых игр без каких-либо загрузок и подписок. Достаточно просто нажать на понравившуюся игру и начать играть! Начните с созданных нами игр, например: Fireboy and Watergirl, Troll Face Quest, Uphill Rush и Bob the Robber.
Не менее популярны и другие, такие как Scary Maze, Ludo Legend, Shell Shockers, The Impossible Quiz и прочие!
Присоединяйтесь к нашему игровому сообществу!
Хотите завести новых друзей? Тогда заведите учетную запись в таких играх, как Family Barn и Goodgame Empire. Каждая из них — живое сообщество из тысяч игроков. Это две из крупнейших многопользовательских онлайн игр всех времен со множеством потрясающих социальных элементов, которые вы теперь тоже можете опробовать.
Наиболее популярные категории игр!
У нас сотни игр любых жанров и на любой вкус. Оцените наши великолепные головоломки, пасьянсы и игры формата «io». Модникам и модницам всех возрастов понравятся наши игры-одевалки. Еще больше впечатлений ждет вас в играх для двух игроков. А хотите, попробуйте себя в роли лидера в захватывающих гонках!
О нас
Ежемесячно наши сайты посещают более 35 миллионов игроков из более чем 150 стран мира. Только с 2014 года в наши игры играли более 19 миллиардов раз!
Миллионы игроков стали поклонниками таких франшиз, как Bubble Shooter, MahJongCon, Sara’s Cooking Class и Happy Wheels, сделав их одними из самых популярных в интернете.
Мы гордимся тем, что являемся владельцами десятков игровых порталов на разных языках мира, включая Agame, Gamesgames, A10, Mousebreaker и многих других.
Рис. A1. Расход воздуха для онлайн-измерений δ 13 C в CO 2. EV, IRGA …
Различные источники выбросов углекислого газа (CO2) можно отличить по соотношению изотопов углерода. Следовательно, измерения атмосферного δ13C (CO2) и концентрации CO2 содержат информацию о смеси источников CO2 в водосборной зоне места атмосферных измерений. Эта информация может быть иллюстративно представлена как средняя сигнатура изотопного источника. В последнее время становится доступным все большее количество непрерывных измерений δ13C (CO2) и CO2, что открывает двери для количественной оценки долей CO2 из различных источников с высоким временным разрешением.Здесь мы представляем метод непрерывного вычисления сигнатуры источника CO2 (δS) и оцениваем наш результат с использованием модельных данных из стохастической модели лагранжевого переноса с инвертированным временем. Только когда мы ограничиваем анализ ситуациями, которые удовлетворяют основным предположениям метода графика Килинга, наш подход обеспечивает правильные результаты с минимальными отклонениями в δS. В среднем это смещение составляет 0,2 с межквартильным размахом около 1,2 ‰ для почасовых данных модели. Вследствие применения требуемых строгих критериев фильтрации 85% точек данных — в основном дневные значения — необходимо отбросить.Применение этого метода к 4-летнему набору данных по CO2 и δ13C (CO2), измеренным в Гейдельберге, Германия, дает отчетливый сезонный цикл δS. Однако разделение этой сезонной сигнатуры источника на доли компонентов источника возможно только в том случае, если известны изотопные конечные члены этих источников, то есть биосфера, δbio, и топливная смесь, δF. По средней записи источника в 2012 г., δbio можно было надежно оценить только летом до (-25,0 ± 1,0) ‰ и δF только для зимы до (-32,5 ± 2,5) ‰.Поскольку было показано, что конечные изотопные члены δbio и δF меняются в течение сезона, круглогодичная оценка доли ископаемого топлива или биосферы невозможна на основе измеренной записи средней сигнатуры источника без дополнительной информации из кадастров выбросов или других измерений индикаторов.
Справочник участников IRgA — apdsp.com
Добро пожаловать в каталог членов IRgA! Члены IRgA являются экспертами в области репродукции и управления широкоформатными документами. Найдите участников в своем регионе, введя название компании, город или штат в поле поиска.
ВСЕ А B C D E F грамм ЧАС я J K L M N О п Q р S Т U V W Икс Y Z 123
Cross Rhodes — это полиграфическая и технологическая фирма с полным спектром услуг, работающая с 2009 года. С тех пор мы в Cross Rhodes стремимся производить продукцию высочайшего качества с использованием новейших технологий и лучших материалов.(Ломбард, Иллинойс)
Cross Rhodes — это полиграфическая и технологическая фирма с полным спектром услуг, работающая с 2009 года. С тех пор мы в Cross Rhodes стремимся производить продукцию высочайшего качества с использованием новейших технологий и лучших доступных материалов (Сент-Луис, Миссури)
Business Document Services, Inc. — это местная компания, созданная для предоставления нашим клиентам высококачественного и превосходного обслуживания по наиболее конкурентоспособным ценам.(Норфолк, Вирджиния, Вирджиния)
Обеспечение широкоформатного цветного и черно-белого копирования * Печать * Услуги сканирования и онлайн-планирование Управление помещениями для строительной отрасли из исторического центра FdL WI с 1996 года! (Фонд дю Лак, Висконсин)
SP&B — это семейная компания, которая с 1946 года предоставляет высококачественные полиграфические услуги в долине Уилламетт.Отнесите свой следующий проект в местную компанию, которая заработала себе репутацию благодаря качеству, сервису и цене. (Озеро Освего, Орегон)
SP&B — это семейная компания, которая с 1946 года предоставляет высококачественные полиграфические услуги в Уилламетт-Вэлли. Предложите свой следующий проект местной компании, которая заработала себе репутацию благодаря качеству, сервису и стоимости. (Кэнби, Орегон)
SP&B — это семейная компания, которая с 1946 года предоставляет высококачественные полиграфические услуги в долине Уилламетт.Отнесите свой следующий проект в местную компанию, которая заработала себе репутацию благодаря качеству, сервису и цене. (Корваллис, Орегон)
SP&B — это семейная компания, которая с 1946 года предоставляет высококачественные полиграфические услуги в Уилламетт-Вэлли. Предложите свой следующий проект местной компании, которая заработала себе репутацию благодаря качеству, сервису и стоимости. (Салем, Орегон)
Salina Blueprint была основана в 1959 году и является семейным предприятием.Наши основные ценности — честность и порядочность — остаются неизменными, и наша корпоративная миссия по-прежнему заключается в предоставлении нашим клиентам продуктов и услуг наивысшего уровня. (Салина, Канзас, Канзас)
Central Digital Resources обеспечивает широкоформатную и малоформатную черно-белую и цветную печать и финишную обработку, а также управление, распространение и архивирование цифровых документов (Нью-Йорк, Нью-Йорк).
Hackworth Reprographics предлагает решения для малоформатной и широкоформатной печати от визитных карточек до баннеров.Мы также продаем и обслуживаем широкоформатные принтеры и сканеры. (Чесапик, Вирджиния, Вирджиния)
A&I Reprographics стремится использовать технологии, инновации и воображение для поддержки каждого из наших клиентов в соответствии с их индивидуальными потребностями. Наша цель — иметь счастливых клиентов. (Онтарио, Калифорния, Калифорния)
CopEx
491 Silver Spring Street, Провиденс, Род-Айленд 02904
CopEx Inc.- это команда честных, трудолюбивых профессионалов, которые стремятся обеспечить всем, кто решит вести с нами дела, успешный, приятный и прибыльный опыт. (Провиденс, Род-Айленд, Род-Айленд)
Flash Reprographics & Blueprinting предлагает полный спектр услуг, включая широко- и малоформатные черно-белые и полноцветные распечатки, плакаты, баннеры, сканирование, печать, футболки и многое другое! Flashblueprinting.com. (Бруклин, Нью-Йорк)
Rozzi Reproduction предлагает комплексные полиграфические услуги, гибкие процедуры заказа, компетентный и дружелюбный персонал по обслуживанию клиентов, а также продукцию по разным ценам. (Сан — Франциско, Калифорния).
Dynamic Reprographics — это незаменимый ресурс для оптимизации выполнения проектов.Мы предоставляем услуги печати и управления цифровыми документами, а также расходные материалы для архитекторов, инженеров, подрядчиков и специалистов по маркетингу. (Остин, Техас, Техас)
Blue Print Specialties обслуживает архитектурную, инженерную и строительную отрасли от начального дизайна до распространения печатных изображений их различных проектов (Лафайет, Индиана).
File RTI Online in Irga, Hazaribag, Hazaribag, Jharkhand
Закон о RTI 2005 г. не предусматривает какого-либо конкретного формата для подачи заявления на получение RTI.Вы можете написать приложение RTI в любом формате. Однако, если вы не знаете, как написать заявление RTI, просто нажмите кнопку Применить сейчас и заполните форму заявления RTI. Мы подадим ваш RTI для Джаркханда.
Для вашего удобства мы предоставляем простой пример формата приложения RTI. Просто составьте заявку в соответствии с форматом, прикрепите IPO или DD в соответствии с требованиями и отправьте ее в PIO концерна. Если вы все же столкнетесь с трудностями при составлении заявления на получение RTI, воспользуйтесь нашей услугой RTI.Просто нажмите кнопку «Применить сейчас» и заполните форму заявки RTI. Мы подадим ваш RTI для Джаркханда.
Дата: 18 августа 2017 г. К, Сотрудник по общественной информации (Название государственного органа) (Адрес государственного органа) Сэр / госпожа: Sub: Запрос информации в соответствии с Законом о праве на информацию, 2005 г. [если применимо] Пожалуйста, предоставьте мне следующую информацию: …………. (Упомяните информация, которую вы хотите, как можно более конкретная и ясная, а также период времени, к которому информация относится) [если применимо] Я прошу получение информации в следующем формате (ах) - верная копия / распечатка / дискета / дискета / магнитная лента / видеокассеты / заверенные копии документов или записей - лично / по почте / по электронной почте.[если применимо] Я хотел бы осмотреть следующие работы / документы / записи / сделать записи / выдержки… .. (четко и конкретно укажите, что требуется для проверки). Пожалуйста, сообщите мне дату и время моего визита. [если применимо] Пожалуйста, предоставьте мне сертифицированные образцы материалов (упомянуть конкретно и ясно материал). Прошу получить сертифицированные образцы (Описать) ……… ... Подробная информация об уплаченных мною гонорарах (укажите)….… .. / Я принадлежу к «Ниже черты бедности» [если применимо, приложите фотокопию доказательства] и я не обязан платить никаких комиссий.Искренне, (Подпись заявителя / оттиск большого пальца) Имя заявителя: Адрес заявителя: Номер телефона / адрес электронной почты заявителя (необязательно): Место: Дата:
Анализ утечек в листовых камерах IRGA открытых систем газообмена: количественная оценка и ее влияние на параметризацию фотосинтеза | Журнал экспериментальной ботаники
Абстрактные
Измерение реакции чистого фотосинтеза на внутренний CO листа 2 (т.е.е. A –C и кривые) широко используется для экофизиологических исследований. В большинстве исследований не учитывался обмен CO 2 между камерой и окружающим воздухом, особенно на двух крайних точках кривых A –C и , где создаются большие градиенты CO 2 , что приводит к ошибочным оценкам А и С и . Количественный анализ утечки CO 2 в камере портативной открытой системы газообмена (Li-6400, LI-COR Inc., NE, США). В пустой камере измеренная утечка CO 2 была аналогична той, которая была рассчитана с использованием уравнений производителя. Однако в присутствии фотосинтетически неактивных листьев величина утечки была существенно снижена, хотя все еще значительна. Эти результаты, вместе с анализом влияния размера камеры, герметичности, скорости потока и материала прокладки, позволяют предположить, что утечка больше на границе раздела между прокладками, чем через прокладки.Эта дифференциальная скорость утечки влияет на параметризацию моделями фотосинтеза. Величина этих ошибок оценивалась на растениях табака. Результаты показали, что утечка приводит к 10% завышению максимальной способности листа к карбоксилированию ( V, c, max ) и завышению на 40% дневного дыхания ( R l ). Использование уравнений производителя привело к большим, нереалистичным корректировкам истинных значений. Фотосинтетический ответ на концентрации CO 2 в хлоропласте (т.е.е. A –C c кривые ) значительно меньше подвержены утечкам, чем кривые A –C и . Следовательно, фотосинтетическая параметризация может быть улучшена путем: (i) корректировки значений A и C i для утечки в камере, оцененной с использованием фотосинтетически неактивного листа; и (ii) использование кривых A –C c вместо A –C и кривых.
Введение
С момента введения модели фотосинтеза Фаркуаром et al. (1980), измерения газообмена и, в частности, реакция чистого фотосинтеза ( A ) на субоматальную концентрацию CO 2 (C i ), то есть кривую A –C i , были широко используется для параметризации фотосинтеза листьев. Анализ кривых A –C и позволяет определить скорость карбоксилирования, регенерацию рибулозобисфосфата (RuBP) или экспорт триозофосфата из хлоропласта, а также количественно оценить максимальную способность карбоксилирования ( V c, max_Ci ), максимальная скорость переноса электронов ( Дж, max_Ci ) и скорость утилизации триозофосфата ( В, TPU_Ci ).Эти анализы оказались полезными для разработки моделей прогнозирования ассимиляции CO 2 для сельскохозяйственных культур (Díaz-Espejo et al. , 2006) и естественной растительности (Xu and Baldocchi, 2003), чтобы помочь предсказать последствия изменения климата. на фотосинтез (Sabaté et al. , 2002), в качестве прочной физиологической основы для масштабирования от листа к целому растению и / или моделей ассимиляции углерода экосистемы (Woodward et al. , 1995), а также для оценки влияния несколько стрессов, таких как засуха (Wilson et al., 2000), соленость (Centritto et al. , 2003), экстремальные температуры (Zhou et al. , 2004), световые ограничения (Schultz, 2003), дефицит питательных веществ (Warren, 2004) или биотический стресс ( Sampol et al. , 2003) о фотосинтетической способности.
Важность и универсальность кривых A –C и для экофизиологических исследований вызвали споры о технических аспектах их работы вместе с техническими ограничениями, которые представляют коммерческие инструменты, разработанные для их анализа (Long and Hällgren, 1993; Long and Bernacchi, 2003).Кроме того, введение комбинированного газообмена с распознаванием изотопов и / или флуоресцентным анализом хлорофилла позволило оценить проводимость мезофилла листа к CO 2 (g m ) и концентрацию CO 2 в хлоропласте (C c ), который часто отличается от C и , поскольку он отличается от атмосферной (C a ) концентрации CO 2 (Evans et al. , 1986; Harley et al. , 1992; Loreto и другие., 1992). Поскольку модель Farquhar et al. (1980) основан на предположении, что кривая A –C i может быть в основном ассимилирована с кинетикой Михаэлиса – Ментен (т. Е. Как A — скорость опосредованной ферментом реакции, а C i — скорость реакции, опосредованной ферментами). концентрация субстрата в месте расположения фермента), тот факт, что C i и C c существенно различаются, указывает на удобство учета g m при параметризации A –C i кривые (Bernacchi et al., 2002; Ethier and Livingston, 2004) или преобразовать их в кривые A –C c до оценки фактических V c_max и J max (Flexas и др. , 2002, 2004; Terashima и Оно, 2002; Мантер и Керриган, 2004; Уоррен и др. , 2004; Гальмес и др. 2006).
Было описано несколько ограничений анализа кривой A –C и (Long and Bernacchi, 2003; Galmés et al., 2006). Например, при некоторых условиях водный стресс или кормление абсцизовой кислотой вызывает неоднородное закрытие устьиц (пятнистость), что делает недействительными оценки C и и, таким образом, интерпретацию кривых A –C и (Terashima , 1992; Бакли и др. , 1997). Более того, когда устьичная проводимость очень низкая, влияние кутикулярной проводимости может ухудшить оценку C i с использованием типичных процедур (Boyer et al., 1997; Flexas et al. , 2002). В дополнение к этим ограничениям, присущим поведению устьиц и базовой формулировке моделей фотосинтеза, также были описаны другие ограничения, связанные с конструкцией наиболее коммерчески доступных систем газообмена. Например, поскольку листовые камеры обычно охватывают небольшую поверхность листа (2–6 см 2 ), окруженную прокладками определенной ширины, освещенная фотосинтезирующая часть листа всегда окружена областью, затемненной прокладками, которые дышат и, таким образом, влияют на измерение фотосинтетического потока.Влияние этого так называемого «краевого» эффекта на скорость дыхания и фотосинтеза было подробно определено количественно (Jahnke and Krewitt, 2002; Pons and Welschen, 2002). Кроме того, значительные ошибки в оценке устьичной проводимости, а затем и в C и , были связаны с ошибками в измерении температуры листа (Tyree and Wilmot, 1990; Verhoef, 1997). Устьичная проводимость может быть завышена на 20–60%, особенно при низких значениях g s , как в стрессовых условиях.
Кроме того, давно известно, но практически игнорируется, что некоторое количество CO 2 может выходить из камеры или попадать в нее через листовые прокладки (Long and Hällgren, 1993). Это особенно важно на двух концах кривых A, –C и , когда создаются большие градиенты CO 2 между камерой и окружающим воздухом. Во многих недавних исследованиях все еще используется анализ кривой A –C i без учета возможных последствий утечек (Centritto et al., 2003; Bota et al. , 2004; Уоррен и др. , 2004; Чжоу и др. , 2004). Другие, как рекомендуют некоторые производители, корректируют чистые значения фотосинтеза после измерения видимых фотосинтетических потоков в отсутствие листа, то есть с пустой камерой (Bernacchi et al. , 2001, 2002; Manter and Kerrigan, 2004; Li- COR, 2005). Однако, насколько нам известно, подробный анализ возникновения и величины утечки через прокладку в различных условиях опубликован не был.Влияние утечки через прокладку на параметризацию фотосинтеза с использованием Farquhar et al. Модель (1980) в значительной степени неизвестна, как и ее возможные эффекты на кривых A –C c . С другой стороны, было обнаружено, что, когда лист помещается в камеру, могут возникать дополнительные утечки, которые невозможно количественно определить путем измерения потоков в пустой камере (Long and Bernacchi, 2003). Таким образом, целями настоящего исследования являются: (i) количественная оценка величины утечки в камерах IRGA при различных условиях; (ii) сравнить величину этих утечек с пустой камерой или с камерой, заполненной листьями; и (iii) количественно оценить влияние таких утечек на параметризацию кривых A –C i и A –C c , полученных для трансгенных линий табака, различающихся фотосинтезом.
Материалы и методы
Растительный материал
Для опытов использовали растения табака( Nicotiana tabacum L.), подвоя виноградной лозы (R-110, Vitis berlandieri × rupestris ) и огурца ( Cucumis sativus ). Четыре разные линии трансформированных растений табака, различающиеся экспрессией аквапорина NtAQP1, как описано Siefritz et al. (2002) и Uehlein et al. (2003 г.). Эти растения были выбраны потому, что, имея идентичную структуру листьев, они постоянно демонстрируют большие различия в кривой ответа A –C i (Flexas et al. , 2006). Поскольку структура и морфология листьев могут влиять на величину утечек (Long and Bernacchi, 2003), эти растения являются идеальным материалом, позволяющим анализировать эффект утечки с использованием одного вида структуры листьев, но с разными фотосинтетическими способностями и без какого-либо стресса. что может привести к пятнистому закрытию устьиц и помешать правильному анализу кривых A –C и (Terashima, 1992; Buckley et al., 1997).
Антисмысловые (AS) и сверхэкспрессирующие растения (O) были получены из разных линий: var. Samsun для AS и Hö 20.20 для O. Нетрансформированные растения каждой линии использовали в качестве контроля (CAS и CO). Линии AS были конститутивными, тогда как в O кодирующая область NtAQP1 находилась под контролем индуцируемого тетрациклином промотора (Uehlein et al. , 2003). Растения выращивали, как описано (Flexas et al. , 2006).
Измерения газообмена и флуоресценции хлорофилла
Газообмен в листьях определяли одновременно с измерениями флуоресценции хлорофилла с использованием открытой системы газообмена Li-6400 (LI-COR Inc., Lincoln, NE, USA) со встроенной головкой флуоресцентной камеры (Li-6400-40; LI-COR Inc.). Если не указано иное, в створчатой камере использовались белые прокладки. Измерения проводили на самом молодом полностью развернувшемся листе. Фактическая фотохимическая эффективность фотосистемы II (ϕ PSII ) была определена путем измерения стационарной флуоресценции ( F с ) и максимальной флуоресценции во время светонасыщающего импульса ∼8000 мкмоль м −2 с — 1 ( F ′ м ) в соответствии с процедурами Genty et al. (1989): Затем скорость переноса электронов ( Дж, ) была рассчитана как:, где PPFD — это плотность потока фотосинтетических фотонов, а α — член, который включает произведение поглощения листьев и распределения поглощенных квантов между фотосистемами I и II. α был ранее определен как наклон зависимости между ϕ PSII и ϕ CO 2 , полученный путем изменения интенсивности света в нефотодыхательных условиях в атмосфере, содержащей <1% O 2 (Valentini et al., 1995).
В адаптированных к свету листьях фотосинтез индуцировали насыщающим светом (1000 мкмоль м -2 с -1 ) и 400 мкмоль моль -1 CO 2 , окружающим лист (C a ) с 15% синего света для максимального увеличения устьичной апертуры. Температура листа поддерживалась на уровне 25 ° C, а дефицит давления паров между листом и воздухом поддерживался между 1 кПа и 2 кПа во всех измерениях. Кривые отклика CO 2 получали в установившемся состоянии, по крайней мере, через 30 минут после зажатия листа.Было получено шесть кривых отклика CO 2 для каждой линии растений. Газообмен и флуоресценцию хлорофилла сначала измеряли при 400 мкмоль-моль -1 , затем C a постепенно увеличивали до 1800 мкмоль-моль -1 и возвращали к исходному значению с последующим ступенчатым уменьшением до 0 мкмоль. моль -1 . A был измерен при 12 различных значениях C и для каждой кривой.
Концентрация CO 2 в хлоропласте (C c ) была оценена на основе комбинированного газообмена и флуоресценции хлорофилла согласно Epron et al. (1995) как: где O — концентрация O 2 в хлоропласте (предполагается, что 0,21 моль-моль -1 ), S — коэффициент специфичности Рубиско, а R l — скорость митохондриальное дыхание на свету. Из-за трудностей получения надежных значений R l с помощью наиболее часто используемых методов (Galmés et al. , 2006; и см. Результаты), темновое дыхание ( R D ) было взято за для R L , согласно Пинелли и Лорето (2003).Значение S , равное 2459 моль-моль -1 , что соответствует точке компенсации CO 2 в отсутствие дыхания (Γ *) 42,75 мкмоль-моль -1 , было взято после Bernacchi et al. (2001). Расчетные значения C c были использованы для преобразования кривых A –C i в кривые A –C c (Terashima and Ono, 2002; Manter and Kerrigan, 2004).Из кривых A –C и были рассчитаны следующие параметры фотосинтеза в соответствии с Long and Bernacchi (2003): митохондриальное дыхание на свету ( R l ), максимальная способность карбоксилирования ( V c , max_Ci ), максимальная скорость переноса электронов ( Дж max_Ci ) и скорость утилизации триозофосфата ( V TPU_Ci ).Из кривых A –C c рассчитывались только максимальная емкость карбоксилирования ( В, c, max_Cc ) и максимальная емкость для скорости переноса электронов ( Дж, max_Cc, ) (Manter and Kerrigan, 2004 ). Температурная зависимость кинетических параметров Rubisco для кривых A –C c была рассчитана согласно Bernacchi et al. (2002).
Анализ утечек
Чтобы установить величину утечки через прокладку, кривые отклика CO 2 с использованием пустой камеры были построены в различных условиях.Эти кривые были выполнены с использованием камер двух разных размеров: камеры 6 см 2 (6400-02B) и камеры 2 см 2 (6400-40). Кроме того, сравнивались два типа прокладок камеры: белая (номер запасной части 6400-30) и черная (номер запасной части 6400-33). Наконец, сравнивали разную герметичность закрытия камеры и разные скорости потока.
Было протестировано несколько методов, направленных на минимизацию величины утечки: (i) покраска всей внешней и внутренней поверхностей прокладок лаком для ногтей; (ii) помещение всей головки камеры в пластиковый пакет; и (iii) окружение прокладок камеры перфорированным трубным кольцом, соединенным с выпускным отверстием второго Li-6400, параллельно идущего по идентичной кривой отклика CO 2 .
Сравнивали утечку пустой камеры и камеры, заполненной инертным табачным листом. Чтобы избежать больших изменений в структуре листьев, листья подвергали термической гибели путем погружения в кипящую воду до тех пор, пока не перестанет обнаруживаться переменная флуоресценция хлорофилла (обычно через несколько минут после начала кипячения), измеренная с помощью PAM-2000 (Walz, Effeltrich, Германия), который считается доказательством общего нарушения фотосинтеза и гибели листьев (Schreiber et al. , 1998). Хотя у нагретого листа наблюдалась некоторая неизбежная потеря тургора, она была явно не такой значительной, как у высушенного листа, используемого Лонгом и Бернакки (2003).Общий вид и толщина вареного листа больше походили на живой лист, чем на высушенный лист или лист бумаги.
Фактические значения A живых листьев были скорректированы простым вычитанием взаимосвязи между C a и «очевидным» фотосинтезом либо пустой камеры, либо камеры, заполненной мертвым листом. Затем значения C i и C c были пересчитаны с использованием формул производителя.
Статистический анализ
Односторонний дисперсионный анализ (ANOVA) применяли для оценки различий для каждого параметра между каждым отдельным контролем и его производной линией.Различия между средними были установлены с помощью теста Дункана ( P <0,1). Данные были проанализированы с помощью программы SPSS 10.0 для Windows.
Результаты и обсуждение
Величина утечки через прокладки пустой камеры при различных условиях
Величина утечки CO 2 в камере IRGA была определена по нескольким кривым A –C i с пустой камерой.Были получены линейные отношения между «очевидным» чистым фотосинтезом и C a (рис. 1A). Применение уравнения производителя для определения коэффициента диффузии k дало k около 0,44, что очень близко к значению 0,46, предоставленному производителем (Li-COR, 2005). Однако, вопреки предложениям производителя (Li-COR, 2005), не было различий между круглой камерой 2 см 2 и прямоугольной камерой 6 см 2 , поскольку обе давали аналогичные отношения для данной установки ( данные не показаны).Изменения скорости потока имели относительно незначительное влияние на величину утечки (рис. 1B). Кроме того, в отличие от предположений производителя о том, что утечку можно обнаружить только при низких скоростях потока (Li-COR, 2005), утечку можно было измерить при всех скоростях потока, включая высокую скорость потока 700 мкмоль с -1 .
Рис. 1.
(A) Реакция потока утечки («очевидный чистый фотосинтез») на концентрацию CO 2 (C a ) в пустой камере 2 см 2 .Значения представляют собой среднее значение ± стандартная ошибка трех повторяющихся кривых. (B) Влияние скорости потока через контур IRGA на утечку. При идентичных условиях с использованием пустой камеры применялись три различных скорости потока: 200, 500 и 700 мкмоль с -1 . Значения представляют собой среднее значение ± стандартная ошибка трех повторяющихся кривых. (C) Влияние герметичности закрытия камеры на утечку (пустая камера). Заполненные кружки представляют собой самую низкую изначально установленную плотность закрытия. Темно-серые кружки — данные с камерой на 1/4 оборота плотнее, светло-серые 3/4, а светлые кружки — на целый оборот плотнее.Для каждой ситуации показана одна репрезентативная кривая. (D) Реакция потока утечки («очевидный чистый фотосинтез») на концентрацию CO 2 (C a ) в пустой камере 2 см 2 с использованием белых и черных прокладок. Для каждого типа прокладки показаны три повторяющиеся кривые.
Рис. 1.
(A) Реакция потока утечки («очевидный чистый фотосинтез») на концентрацию CO 2 (C a ) в пустой камере 2 см 2 .Значения представляют собой среднее значение ± стандартная ошибка трех повторяющихся кривых. (B) Влияние скорости потока через контур IRGA на утечку. При идентичных условиях с использованием пустой камеры применялись три различных скорости потока: 200, 500 и 700 мкмоль с -1 . Значения представляют собой среднее значение ± стандартная ошибка трех повторяющихся кривых. (C) Влияние герметичности закрытия камеры на утечку (пустая камера). Заполненные кружки представляют собой самую низкую изначально установленную плотность закрытия. Темно-серые кружки — данные с камерой на 1/4 оборота плотнее, светло-серые 3/4, а светлые кружки — на целый оборот плотнее.Для каждой ситуации показана одна репрезентативная кривая. (D) Реакция потока утечки («очевидный чистый фотосинтез») на концентрацию CO 2 (C a ) в пустой камере 2 см 2 с использованием белых и черных прокладок. Для каждого типа прокладки показаны три повторяющиеся кривые.
Влияние герметичности камеры на утечку было проверено путем выполнения кривых A, –C и в пустой камере при четырех различных уровнях герметичности (начальный, 1/4, 3/4 и полный оборот). гайки).Плотность закрытия существенно не повлияла на величину утечки (рис. 1С). Следовательно, уменьшение поверхности прокладки, контактирующей с границей раздела между внутренней и внешней частью камеры, не оказало значительного влияния на утечку. Также была проверена величина утечки через два разных типа прокладок, предоставленных LI-COR (номера запасных частей 6400-30 и 6400-33) (рис. 1D). Хотя черные неопреновые прокладки имеют более низкий коэффициент диффузии CO 2 , чем белые прокладки (Li-COR, 2005), величина утечки была намного больше при использовании первых (рис.1D). Эти результаты убедительно свидетельствуют о том, что большая часть утечки в камере происходит между двумя уплотнительными прокладками, а не через саму прокладку. Некоторые исследователи используют смазку для улучшения уплотнения между листом и прокладкой, что, с учетом результатов, может быть хорошим способом уменьшить утечку.
Попытки устранить или минимизировать утечку
Было протестировано несколько методов предотвращения или уменьшения утечки. Эти методы включали (i) покраску всей внешней и внутренней поверхностей прокладок лаком для ногтей; (ii) помещение всей головки камеры в пластиковый пакет; и (iii) окружение прокладок камеры трубчатым кольцом, подающим наружный воздух вблизи прокладок с концентрацией CO 2 , идентичной внутренней.Покраска поверхностей прокладок лаком для ногтей, который, как известно, в значительной степени непроницаем для воздуха, не изменила величину утечки (данные не показаны), что подтверждает идею о том, что большая часть утечки происходит между двумя прокладками. Эффекты окружения прокладок промывочным кольцом CO 2 или заключения камеры в пластиковый пакет, кроме того, показаны на рис. 2. Эти манипуляции способствовали уменьшению величины утечек, так что максимальное снижение было достигнуто при объединении корпуса камеры в полиэтиленовом пакете с промывкой CO 2 вокруг прокладок (рис.2). Даже в этом случае большая часть общей утечки (~ 80%) осталась даже при принятии этих мер предосторожности, что говорит о том, что эти методы не устраняют утечки полностью. Для этого могло быть несколько причин. Во-первых, типичный временной ход кривой A –C i (т.е. несколько минут между каждым изменением концентрации CO 2 ), используемый здесь, может быть недостаточным для обеспечения полного уравновешивания между CO 2 концентрации снаружи и внутри камеры, особенно когда большой мешок (т.е.е. большой объем воздуха). Во-вторых, давление воздуха внутри камеры всегда немного выше, чем снаружи, чтобы избежать проникновения CO 2 , и поэтому некоторая утечка наружу может быть неизбежной (Li-COR, 2005; Jahnke and Pieruschka, 2006). Достичь идеального прилегания довольно сложно и еще сложнее при измерении живого прикрепленного листа. С другой стороны, промывка прокладок CO 2 также кажется недостаточной, не говоря уже о том, что возможность использования двух IRGA одновременно недоступна для большинства исследователей.Следовательно, предложенные методы минимизации утечки камеры IRGA не кажутся многообещающими инструментами для правильного измерения кривых A –C i ; следовательно, следует сделать вывод, что их необходимо правильно оценить и использовать такие оценки для корректировки данных A –C i .
Рис. 2.
Реакция потока утечки («очевидный чистый фотосинтез») на концентрацию CO 2 (C a ) в пустой камере размером 2 см 2 (черные квадраты) на внешнюю продувку окружающего воздуха прокладки с той же концентрацией CO 2 , что и внутри (белые квадраты), или путем помещения камеры в пластиковый пакет и промывки CO 2 (белые кружки).Для каждой ситуации показана одна репрезентативная кривая. Примечание: для этого конкретного эксперимента концентрация CO 2 в комнате составляла около 500 мкмоль-моль -1 .
Рис. 2.
Реакция потока утечки («очевидный чистый фотосинтез») на концентрацию CO 2 (C a ) в пустой камере 2 см 2 (черные квадраты) при продувке извне воздухом окружение прокладок с такой же концентрацией CO 2 , что и внутри (белые квадраты), или путем заключения камеры в пластиковый пакет и промывки CO 2 (белые кружки).Для каждой ситуации показана одна репрезентативная кривая. Примечание: для этого конкретного эксперимента концентрация CO 2 в комнате составляла около 500 мкмоль-моль -1 .
Сравнение утечек из пустых камер и камер, заполненных засохшими листьями
Поскольку величина утечки казалась важной, а попытки минимизировать ее в значительной степени провалились, может показаться, что наиболее удобным способом проведения исследований A –C i было бы количественно оценить величину утечки в каждом состоянии. а затем скорректируйте полученные кривые A –C и соответственно, как было предложено ранее (Bernacchi et al., 2002; Long and Bernacchi, 2003).
Однако, когда створка помещается в камеру, степень утечки может отличаться от таковой в пустой камере, особенно если, как показывают приведенные выше данные, большая часть утечки происходит на границе раздела между двумя уплотнительными прокладками, где размещены створки. . Следовательно, необходимо получить фотосинтетически инертные листья и поместить их в камеру для количественного определения утечек, которые могут возникнуть при измерении живого листа. Лонг и Бернакки (2003) рекомендуют использовать мертвый лист, полученный путем быстрой сушки живого образца.Однако сушка может привести к потере около 80% массы и, таким образом, к важным изменениям толщины листа. Общая структура листа, убитого этим методом, может быть не очень сопоставима со структурой неповрежденного живого листа, что мешает интерпретации утечки. Чтобы избежать больших изменений в структуре листа, было решено убить лист термически, погрузив его в кипящую воду. Используя эту процедуру, лист терял меньше воды по сравнению с сушкой, а внешний вид мертвого листа был намного ближе к живому.Лист был погружен в кипящую воду до тех пор, пока не перестанет обнаруживаться переменная флуоресценция хлорофилла (обычно через несколько минут после начала кипячения), что было принято в качестве доказательства общего нарушения фотосинтеза и гибели листа.
С помощью этой процедуры была проанализирована величина утечки в фотосинтетически неактивных листьях V. berlandieri × rupestris , C. sativus и N. tabacum (рис. 3). В отличие от того, что предполагалось ранее (Long and Bernacchi, 2003), величина утечки была намного ниже, когда лист находился внутри камеры, чем при использовании пустой камеры, независимо от анализируемых видов.Эти результаты в значительной степени подтверждают идею о том, что утечка происходит между двумя прокладками. Если это так, лист в середине прокладок увеличил бы диффузионное сопротивление системы из-за шероховатости поверхности, в то время как различия в скорости утечки между видами (рис. 3), возможно, можно было бы интерпретировать как различия в морщинистости листа. Хотя величина утечки была уменьшена при наличии мертвого листа, она все еще была значительной. Более того, тот факт, что величина утечек сильно различается между разными листьями, предполагает, что для повышения точности и значимости анализа A –C i важно оценить степень утечки для любого конкретного вида. при любых условиях, т.е.е. для любых конкретных условий эксперимента. Тот факт, что утечка была больше у гетеробарических видов, таких как Vitis , чем у гомобарического табака, предполагает, что утечка между поверхностями листа и прокладки намного больше, чем возможная утечка через мезофилл листа (Jahnke and Krewitt, 2002; Pieruschka et al. , 2005).
Рис. 3.
Сравнение потока утечки («очевидный чистый фотосинтез») с концентрацией CO 2 (C a ) в пустой камере 2 см 2 (белые кружки) и камере, заполненной термически убитым листья В.berlandieri × rupestris (закрашенные прямые треугольники), C. sativus (закрашенные кружки) и N. tabaccum (закрашенные перевернутые треугольники).
Рис. 3.
Сравнение потока утечки («кажущийся чистый фотосинтез») с концентрацией CO 2 (C a ) в пустой камере 2 см 2 (белые кружки) и камере, заполненной термически убитые листья V. berlandieri × rupestris (закрашенные прямые треугольники), C.sativus (закрашенные кружки) и N. tabaccum (закрашенные перевернутые треугольники).
Из-за больших различий в величине утечки в пустых камерах по сравнению с камерами, заполненными фотосинтетически неактивным листом, использование любой основы для корректировки истинных значений A и C i может дать разные результаты. Это проиллюстрировано на рис. 4 для табачного листа. Кривая A –C i была построена, и значения либо не корректировались, либо корректировались с использованием коэффициента диффузии производителя k , равного 0.46, исправленный с использованием «очевидного фотосинтеза» пустой камеры, или исправленный с использованием «очевидного фотосинтеза» вареного листа. Понятно, что все исправления так или иначе повлияли на значения A и C i . Корректировки с использованием «очевидного фотосинтеза» пустой камеры или прямого использования коэффициента диффузии производителя дали аналогичные результаты. Скорректированный фотосинтез сильно отличался от нескорректированных значений, особенно при высоких концентрациях CO 2 (рис.4А). Однако фотосинтез, скорректированный с использованием «очевидного фотосинтеза» вареного листа, не так сильно отличался от нескорректированных показателей. Следовательно, использование исправлений производителя может предполагать, что утечка приводит к ошибкам в ± 10% в оценках A , в зависимости от C и , но использование фотосинтетически неактивного листа показывает, что ошибки составляют только приблизительно ± 2% ( Рис. 4В).
Рис. 4.
(A) Реакция A на субоматальную концентрацию CO 2 , C i , в CAS-заводе N.tabaccum , без коррекции (белые кружки) или после коррекции утечек, полученных с пустой камерой (бледно-серые кружки), уравнения производителя с k = 0,46 (темно-серые кружки) или протечек, полученных с мертвым листом (темные кружки) ). (B) Разница в процентах в оценочном A N при использовании различных поправок по сравнению с некорректированными значениями.
Рис. 4.
(A) Реакция A на субоматальную концентрацию CO 2 , C i , в установке CAS N.tabaccum , без коррекции (белые кружки) или после коррекции утечек, полученных с пустой камерой (бледно-серые кружки), уравнения производителя с k = 0,46 (темно-серые кружки) или протечек, полученных с мертвым листом (темные кружки) ). (B) Разница в процентах в оценочном A N при использовании различных поправок по сравнению с некорректированными значениями.
Влияние утечки на параметризацию фотосинтеза из кривых A – C
iХотя величина утечки была ниже при зажатии листа, чем при использовании пустой закрытой камеры, она все же была значительной и различалась для разных видов.Поэтому была предпринята попытка исследовать влияние такой утечки на параметризацию фотосинтеза с использованием модели Farquhar et al. (1980). Трансформированные растения табака, различающиеся экспрессией аквапорина NtAQP1, были выбраны для анализа, потому что, имея идентичную структуру листа, они постоянно демонстрируют большие различия в их чистой скорости ассимиляции и кривой ответа A –C i (Flexas et al. , 2006). Кривые A –C i для четырех табачных линий либо не корректировались на утечку, либо корректировались на утечку, оцененную с использованием пустой камеры, либо корректировались на утечку, рассчитанную с использованием фотосинтетически неактивного табачного листа (рис.5). Хотя различия могут быть очевидными, но небольшими, существенные различия появились в некоторых параметрах (таблица 1), когда фотосинтез параметризовали после Long and Bernacchi (2003).
Таблица 1. Параметры фотосинтезаиз кривых A –C i без поправки на утечки (NC) или с поправкой на утечки, протестированные с использованием мертвого листа табака (CD) или пустой камеры (CE)
.6 ± 5,9 17,6 ** 115,62Генотип | NC | CD | CE | % CD | % CE | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
V cmax_Ci | CAS 10829. | 96,7 ± 5,1 | 89,4 ± 5,0 | 10,9 * | 17,7 ** | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
AS | 89,2 ± 6,8 | 80,2 ± 6,1 | 73,3 ± 5,1 1029,1 | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
CO | 113,4 ± 7,1 | 101,9 ± 5,9 | 99,1 ± 5,8 | 9,9 | 12,5 | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
O | 8,2 128,4 111.4 ± 6,3 | 9,7 * | 13,4 ** | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
Среднее значение | 10,1 * | 15,3 ** | |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
C макс. ± 7,6 | 155,3 ± 6,8 | 147,3 ± 8,0 | 8,2 * | 12,1 ** | |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
AS | 141,5 ± 6,9 | 142,4 ± 5,6 | 123,7 ± 4,3 1,7 ± 0,23
|