Ильмер бк: Главная - БК Ильмер
Клуб им. С.А. Яшкина — Великий Новгород
Межрегиональный этап Первенства России сезон 2019 — 2020 года!
С 23 по 27 октября 2019 года в Великом Новгороде прошел Межрегиональный этап Первенства России по баскетболу среди юношей 2005 г. р. сезона 2019 – 2020 года. В этих соревнованиях приняли участие 5 команд — «ДЮБК им. С. А. Яшкина — Манеж» (Великий Новгород), БК «Ильмер — Манеж» (Великий Новгород), СШ № 9 Калининград, СШ № 1 Котлас (Архангельская область) и СШОР Всеволожск (Ленинградская область). Игры проходили по «круговой системе». За пять дней, наша команда отыграла четыре игры, одержала три победы, заняла второе место и вышла в Полуфинальный этап Первенства России.Руководство Клуба поздравляет ребят с этим результатом.
Итоговое положение команд:
1. БК «Ильмер — Манеж» (Великий Новгород)
2. ДЮБК им. С. А. Яшкина — Манеж» (Великий Новгород)
3.
4. Котлас (Архангельская область)
5. СШОР Всеволожск (Ленинградская область)
По регламенту данных соревнований, в первый тур полуфинального этапа Первенства России вышли команды, занявшие 1-3 место, а также Котлас получил вайткарт.
Лучшим игроком нашей команды был признан Даниленко Даниил.
Самыми результативными игроками нашей команда стали:
Даниленко Даниил, Дорошкевич Максим, Захаров Михаил, Иванов Антон и Стяжкин Захар.
По подборам отличились — Даниленко Даниил, Стяжкин Захар, Дорошкевич Максим
По голевым передачам – Захаров Михаил, Иванов Антон, Дорошкевич Максим.
По перехватам – Захаров Михаил и Даниленко Даниил
По блокшотам – Даниленко Даниил
Также отличились личными статистическими показателями по Межрегиональному этапу Северо – Запада (5 команд, 57 игроков):
Даниленко Даниил стал первым по подборам (53), первый по блокшотам (11), второй по перехватам (25), второй по коэффициенту полезности (+103), также вошел в пятерку самых результативных игроков (за пять игр он принес своей команде 85 очков).
Захаров Михаил стал первый по перехватам (26), вошел в пятерку лучших по результативным передачам (10), вошел в 10 – ку лучших по подборам (31), по набранным очкам (43), по коэффициенту полезности (+46).
Иванов Антон вошел в 5 – ку лучших по результативным передачам (10)
Дорошкевич Максим вошел в 10 – ку лучших по результативным передачам (8), по набранным очкам (43).
Стяжкин Захар вошел в 10 – ку лучших по подборам (39), по блокшотам (4) и коэффициенту полезности (+49).
Также Даниленко Даниил и Захаров Михаил отличились по личным статистическим показателям всего Межрегионального этапа Первенства России (44 команды, более 500 игроков).
Даниил вошел в тройку лучших по перехватам, в пятерку лучших по блокшотам, в 10 – ку лучших по подборам, набранным очкам и коэффициенту полезности.
Михаил занимает первое место по перехватам.
Директор клуба и главный тренер команды Яшкин Сергей Сергеевич выражает благодарность всем воспитанникам клуба, их родителям, друзьям клуба, которые приходили на игры и поддерживали наших ребят!!! Всем большое спасибо!
Начало нового спортивного сезона 2019 — 2020 года!
13 – 15 сентября в Великом Новгороде проходило открытое Первенство Новгородской области среди юношей 2005 — 2006 г. р.В соревнованиях участвовали 5 команд из Великого Новгорода, Старой Руссы, Пскова и Пестово.
Команда «БК имени С. А. Яшкина — Манеж» отыграла четыре игры, одержала три победы.
В финальной игре за первое место, уступила восемь очков команде БК «Ильмер». Заняла второе место и стала Серебряным призёром Первенства Новгородской области.
Впервые, в состав команды вошли наши младшие воспитанники 2007 — 2008 года, которые играли в одной команде со старшими ребятами и получили для себя огромный опыт.
Тренер Яшкин Сергей Сергеевич доволен физической и технической подготовкой своих воспитанников. Ребята здорово играли, с самоотдачей.
Основной проблемой на данных соревнованиях стал наш малочисленный состав команды.
Несколько ребят не смогли принять участие в данных соревнованиях из-за болезни, некоторые ребята «ушли на больничный» сразу после соревнований.
Мы ждем выздоровления Иванова Антона (игрок основного состава), его очень не хватало команде…
И готовимся к основным соревнованиям – Межрегиональному этапу Первенства России!
Также, есть хорошая новость по составу нашей основной команды, в ближайшее время к нам «вольется» новый игрок (воспитанник Самарской спортивной школы) и сможет оказать помощь нашим ребятам!
Отдельно БЛАГОДАРИМ наших родителей, старших и младших воспитанников клуба за ВАШУ ПОДДЕРЖКУ на соревнованиях.
ВСЕМ БОЛЬШОЕ СПАСИБО!
Межрегиональный этап Первенства России сезона 2018 — 2019 года. Второе место.
Информация с официального сайта Российской Федерации баскетбола.18 ноября состоялись последние матчи Межрегиональных соревнований среди юношей 2005 года рождения.
В Межрегиональных соревнованиях приняли участие 57 команд, которые разыграли 6 Первенств Федеральных округов.
Первенство Северо-Западного ФО
Это Первенство, проходившее в Великом Новгороде, завершилось триумфом двух команд-хозяек. 7 участников были разбиты на две группы, и в Полуфинальный раунд выходили по две лучшие из каждой. В группе А без потерь провел все 3 матча ДЮБК им. С.А. Яшкина – СШОР «Манеж». Вслед за ним финишировала псковская СШ «Ника», в игре за второе место уверенно обыгравшая калининградскую СШОР по ИВС (59:36). В другой группе, где выступали три команды, первенствовал БК «Ильмер» — СШОР «Манеж».
Полуфинальные встречи оказались достаточно упорными. Особенно непросто пришлось ДЮБК им. С.А. Яшкина, которая выиграла у череповчан лишь 4 очка (73:69). И, оставив достаточно сил в этой игре, она уступила в финальном дерби БК «Ильмер» — 60:74.
Группа А
1. ДЮБК им. С.А. ЯШКИНА – СШОР МАНЕЖ, Великий Новгород (3-0).
2. СШ НИКА, Псков (2-1).
3. СШОР по ИВС, Калининград (1-2).
4. ДЮСШ – Динамо Росэнергоатом, Сосновый Бор (0-3).
Группа Б
1. БК ИЛЬМЕР – СШОР МАНЕЖ, Великий Новгород (2-0).
2. СШ №3, Череповец (1-1).
3. ВСШОР, Всеволожск (0-2).
Плей-офф
1. БК ИЛЬМЕР – СШОР МАНЕЖ.
2. ДЮБК им. С.А. Яшкина – СШОР Манеж.
3. СШ №3.
4. СШ Ника.
5. СШОР по ИВС.
6. ДЮСШ – Динамо Росэнергоатом.
7. ВСШОР.
Самый яркий игрок: Егор Гуричев (ДЮБК им. С.А. Яшкина – СШОР «Манеж»).
Также, Егор по личным статистическим показателям вошел в тройку самых результативных игроков из 57 команд всего Межрегионального этапа Первенства России. За пять игр он принес своей команде 130 очков. Вошел в 20 — ку лучших по результативным передачам (16), коэффициент полезности +123 (в 10 — ке лучших), провел на площадке 146 мин.06 сек.
игрового времени.
Отличился личными статистическими показателями и другой воспитанник нащего клуба — Даниленко Даниил.
Из всех игроков 57 команд Межрегионального этапа Даниил стал первый по блокшотам (19), вошел в тройку лучших по подборам (16 в среднем за игру, за 5 игр — 80 подборов), вошел в 10 — ку лучших по дабл-даблам (4 за 5 игр), коэффициент полезности +115 (в 20 — ке лучших), провел на площадке 114 мин. 11 сек. игрового времени.
Сергей Сергеевич выражает благодарность ВСЕМ РОДИТЕЛЯМ, ВОСПИТАННИКАМ, ДРУЗЬЯМ КЛУБА, которые приходили на игры поддержать нашу команду!!! БОЛЬШОЕ ВАМ СПАСИБО!!!
Парни старались, не все получилось, но ничего страшного… Это стимул тренироваться и совершенствоваться дальше.
Впереди у наших ребят выезд на второй тур Балтийской Баскетбольной Лиги, который будет проходить в Риге 30 ноября — 02 декабря.
Начало нового спортивного сезона!!!
С двух Первенств Новгородской области начался новый спортивный сезон для воспитанников клуба 2003 – 2005 г. р.!14 – 16 сентября в Великом Новгороде в спортивном комплексе «Манеж» проходило Открытое Первенство Новгородской области среди юношей 2003 г. р.
В нём приняли участие команды с Пестово, Старой Руссы, Петрозаводска, Великий Новгород представляли три команды БК «Ильмер» (2003, 2004 и 2005) и воспитанники нашего клуба 2003 – 2005 г.
За три дня наша команда «БК им. С. А. Яшкина» отыграла четыре игры с Пестово, Петрозаводском, БК «Ильмер» 2003 и БК «Ильмер» 2004. Парни одержали победу с Пестово, показали интересную игру с Петрозаводском и без проблем обыграли БК «Ильмер» 2004 в борьбе за третье место.
Итоговый результат соревнований –
«БК им. С. А. Яшкина» — бронзовый призёр Первенства Новгородской области среди юношей 2003 г. р.
23 сентября завершилось Открытое Первенство Новгородской области по баскетболу среди юношей 2004 г. р., которое также проходило в СК «Манеж» 21 – 23 сентября!
В Первенстве приняли участие шесть команд – Старая Русса, Пестово, Псков, Ильмер , Манеж 2005 и «БК имени С. А. Яшкина» 2004-2005. В этих соревнованиях приняли участие 13 игроков нашего клуба — 5 ребят 2004 р. г., 7 воспитанников 2005 и один 2006 г. р.
Наша команда отыграла четыре игры, одержала три победы. В финальной игре за первое место встретились «БК имени С. А. Яшкина» и БК «Ильмер». Скажем сразу, что уже несколько раз команды встречались на паркете, знают сильные и слабые стороны друг — друга. Однозначные плюсы БК «Ильмер» — высокий рост, против нашей техники и скорости. Наши парни настраивались на победу… Но не всё получилось в этой игре у нашей команды, т. к. усиление БК «Ильмер» шестью мощными, высокими иногородними игроками значительно усложнило задачу нашим ребятам, учитывая, что больше половины команды – младшей возрастной категории. Несмотря на все трудности, ребята смогли собраться. Две четверти вели в счёте, третью четверть играли «очко в очко», не хватило чуть – чуть… Показали красивый, техничный баскетбол. Порадовали нас забитыми средними и дальними мячами. Выглядели технично, красиво, достойно…
На сегодняшний день «БК имени С. А. Яшкина» стал серебряным призёром Первенства Новгородской области среди юношей 2004 г. р.! Это достойный результат! ВСЕ МОЛОДЦЫ!
Открытое Первенство Новгородской области среди юношей 2005-2006 г. р. Второе место! Серебряные медали!
11 – 13 мая в Великом Новгороде проходило открытое Первенство Новгородской области среди юношей 2005 г. р. В соревнованиях участвовали 5 команд из Великого Новгорода, Старой Руссы, Ржева и п. Хвойная.Команда «ДЮБК имени С. А. Яшкина» отыграла четыре игры, одержала три победы.
В финальной игре за первое место, в овертайме, уступила пять очков команде БК «Ильмер». Заняла второе место и стала Серебряным призёром Первенства Новгородской области. Ребята молодцы, мы их поздравляем с этим результатом. У парней был очень тяжёлый сезон, три наших спортсмена, не восстановились ещё после травм. Игра была полностью «на равных», нам немного не хватило состава. Мяч круглый… Всё победы ещё впереди.
Итоги Полуфинального этапа Первенства России сезона 2017 — 2018 года!
С 27 марта по 02 апреля 2018 года в Москве прошёл второй раунд Полуфинального этапа Первенства России по баскетболу среди юношей 2005 г. р. Команда «ДЮБК имени С. А. Яшкина» за семь дней отыграла шесть игр с командами ЦСКА (Москва), Тринта (Москва), БК «Ильмер» (Великий Новгород), Старый Оскол и Санкт — Петербург (СШ Купчинский Олимп и СШ Василеостровского р-на). Наши ребята одержали три победы над командами Санкт – Петербурга и БК «Ильмер» и потерпели три поражения с Осколом, ЦСКА и Тринтой.В интересной и напряжённой борьбе прошла игра с одной из лучших команд России — Тринтой. Наши воспитанники с первой по последнюю минуту игрового времени играли на «характере», показали хорошую «защиту», красивый и техничный баскетбол. Несмотря на проигрыш в 15 очков, наша команда смогла сыграть вничью третью четверть и выиграть четвертую.
Большая разница в счете с ЦСКА также не отображает полную картину игры, полностью «провалив» первую четверть, парни собрались и очень достойно смотрелись во второй половине игры.
Игровой опыт с сильнейшими командами России очень важен для дальнейшего развития команды, ребята своими глазами видят к чему надо стремиться, как надо играть.
По итогам двух раундов Полуфинального этапа Первенства России команда «ДЮБК имени С. А. Яшкина» отыграла 11 игр, заняла пятое место из 12 – ти команд.
Первый раунд Полуфинального этапа Первенства России.
С 24 по 29 января 2018 года в городе Мытищах прошёл первый раунд Полуфинального этапа Первенства России по баскетболу среди юношей 2005 г. р. Команда «ДЮБК имени С. А. Яшкина» за шесть дней отыграла вкруг пять игр с командами БК «Химки» (Московская обл.), Мытищи (Московская обл.), БК «Лобня», Санкт — Петербург (СШ Красносельского района) и СК «Муссон» (Севастополь). Наши ребята одержали две победы над командами Севастополя и Лобни и три поражения. В интересной и напряжённой борьбе прошла игра с БК «Химки». По итогам первого раунда у трёх команд было три поражения и две победы, после подсчёта очков (забитых и пропущенных мячей) места распределились следующим образом:1 место Мытищи
2 место БК «Химки»
3 место Санкт — Петербург
4 место «ДЮБК им. С. А. Яшкина»
5 место «Лобня»
6 место Севастополь
Лучшим игроком нашей команды был признан Гуричев Егор.
По общестатистическим показателям среди всех игроков Межрегионального этапа и Первого раунда Полуфинального этапа Первенства России Гуричев Егор вошёл в 15 — ть лучших по результативности (по набранным очкам), Даниленко Даниил — в 10 — ку лучших по подборам и в 25 — ть лучших по блокшотам.
Во втором раунде Полуфинального этапа, который пройдёт в Москве, мы встретимся с командами, выступавшими в Старом Осколе: СШОР «ЦСКА» (Москва), СШОР №49 «Тринта» им. Ю.Я. Равинского (Москва), СДЮСШОР «Купчинский Олимп» (Санкт — Петербург), БК «Ильмер» — СШОР «Манеж» Великий Новгород, СШОР Василеостровского района (Санкт — Петербург) и СШ «Юность» (Старый Оскол).
Положение перед 2-м раундом Полуфинального этапа:
Определились сроки и места проведения Полуфинального этапа среди юношей 2001 и 2005 годов рождения и девушек 2002 года рождения!
Мытищи (24-29 января):
Мытищи (СШОР по баскетболу), Химки (СШОР №1), Санкт-Петербург (ДЮСШ Красносельского района), Севастополь (СК «Муссон»), Великий Новгород (БК им. С.А. Яшкина – СШОР «Манеж»), Лобня (БК «Лобня»).
Второй раунд пройдет в конца марта-начале апреля в четырех группах (по 12 команд). С учетом результатов первого раунда каждая из команд встретится с шестью соперниками из соседней группы.
Москва, СШОР №49 «Тринта» им. Ю.Я. Равинского (27 марта-2 апреля):
Старый Оскол (СШ «Юность»), Великий Новгород (БК «Ильмер» — СШОР «Манеж»), Санкт-Петербург (СДЮСШОР «Купчинский Олимп»), Москва (СШОР №49 «Тринта» им. Ю.Я. Равинского), Москва (СШОР «ЦСКА»), Санкт-Петербург (СДЮСШОР Василеостровского района), Мытищи (СШОР по баскетболу), Химки (СШОР №1), Санкт-Петербург (ДЮСШ Красносельского района), Севастополь (СК «Муссон»), Великий Новгород (БК им. С.А. Яшкина – СШОР «Манеж»), Лобня (БК «Лобня»).
В Финальном этапе Всероссийских соревнований примут участие 16 команд — по 4 лучшие из каждой группы второго раунда Полуфинального этапа.
https://russiabasket.ru/news/33576/
Поздравляем команду «ДЮБК имени С. А. Яшкина» (юноши 2005 — 2006 г. р.) и тренера Яшкина Сергея Сергеевича с выходом в Полуфинальный этап Первенства России!!!
С 24 по 28 ноября 2017 года в Великом Новгороде прошел Межрегиональный этап Первенства России по баскетболу среди юношей 2005 г. р. В этих соревнованиях приняли участие 6 команд — «ДЮБК им. С. А. Яшкина — Манеж» (Великий Новгород), БК «Ильмер — Манеж» (Великий Новгород), СДЮШОР № 1 Адмиралтейского р-на (Санкт — Петербург), ДЮСШ №3 Череповец, ДЮСШ «Лидер» (Тверь) и СШОР Всеволожск. Игры проходили по «круговой системе». За пять дней, наша команда отыграла пять игр, одержала четыре победы, заняла второе место и досрочно вышла в Полуфинальный этап Первенства России.Руководство Клуба поздравляет ребят с этим высоким и достойным результатом. Лучшим игроком «ДЮБК имени С. А. Яшкина» был признан капитан команды — Гуричев Егор.
Итоговое положение команд:
1. СДЮШОР № 1 Адмиралтейского р-на (Санкт — Петербург)
2. ДЮБК им. С. А. Яшкина — Манеж» (Великий Новгород)
3. БК «Ильмер — Манеж» (Великий Новгород)
4. ДЮСШ №3 Череповец
5. ДЮСШ «Лидер» (Тверь)
6. СШОР Всеволожск
Первый тур Полуфинального этапа пройдёт с 21 по 28 января 2018 года.
Директор клуба и главный тренер команды Яшкин Сергей Сергеевич выражает благодарность всем воспитанникам клуба, их родителям, друзьям клуба, которые приходили на игры и поддерживали наших ребят!!! Всем большое спасибо! МЫ ОДНА КОМАНДА!!!
Проект «Я выбираю Мяч!» — победитель конкурса президентских грантов – для школьников Новгородской области стартует в Старой Руссе
18. 03.2021
16 марта в Старой Руссе состоялась рабочая встреча по проведению Дня Баскетбола в Старорусском районе.
Рабочая встреча прошла на базе старорусской гимназии. В ней приняли участие Горбач Н.Ю., председатель спорткомитета администрации города, Вишнякова Т.А., ведущий специалист комитета образования, Матюшкина Т.В., директор МАОУ «Гимназия», учителя физической культуры МАОУ « Гимназия» Светлакова Н.В. и Суворов В.Н. из школы №8, а также представители БК «Ильмер».
PR-менеджер баскетбольного клуба Хорошаева Е.С. провела презентацию баскетбольного клуба и познакомила с проектом «Я выбираю МЯЧ!». День баскетбола в рамках проекта состоится 30 марта на базе школы №8.
Проект направлен на популяризацию баскетбола среди детей и подростков 10-18 лет с целью увеличения количества детей и подростков, систематически занимающихся баскетболом и стритболом.
В программа проекта предусмотрены:
— развивающая игра по станциям, для младших школьников;
— мастер-класс с участием Заслуженного тренера России, Хорошаева Ю. В., для средних школьников;
— товарищеская игра по баскетболу сборной команды района из числа старших школьников с воспитанниками БК «Ильмер»;
— VIP турнир по стритболу для ветеранов;
— консультации учителей физической культуры и тренеров района по вопросам баскетбола и программе «Одарённые дети»;
— консультации старших школьников по поступлению в НовГУ и колледжи Великого Новгорода, проведёт тренер студенческой команды – Ноздрачёв. К.С.;
— консультации для родителей о мерах поддержки, которые могут быть предоставлены ребятам (в том числе БК «Ильмер» и нашими партнерами).
— атмосферу праздника поддержат представители федерации чирлидинга Новгородской области.
известны все участники Полуфинала 2.
29.12.2018
Вчера состоялись последние матчи первого Полуфинального раунда Первенства России среди юношей 2004 года рождения.
Изначально планировалось, что в Полуфинале 1 сыграют 48 команд (8 групп по 6). Однако из-за отказов количество участников сократилось до 46. Они разыграли 24 путевки во второй Полуфинальный раунд (из каждой группы выходили по 3 лучшие команды). Еще 5 участников были определены раньше — во Всероссийских соревнованиях «Путь сильнейших», которые прошли параллельно с Первенствами Федеральных округов. Наконец, последняя команда была определена согласно решению отдела по организации и проведению детско-юношеских соревнований.
Воронеж
Здесь сыграли всего 5 команд – без уважительной причины отказалась ДЮСШ №1 из Северодвинска. Хозяева имели подавляющий перевес над остальными участниками. Самая скромная победа СДЮСШОР №9 составила «+28» (75:47) – во встрече с занявшим второе место БК «Спартак-Приморье». Владивостокцы преподнесли сюрприз в предпоследний день, когда в напряженном поединке обыграли СШОР №1 Центрального района (47:46). В свою очередь, питерские юноши пробились в Полуфинал 2 с громадным трудом. В матче, в котором, как потом оказалось, решилась судьба 3-го места, они с минимальным перевесом взяли верх над тверской ДЮСШ «Лидер» (52:51).
1. СДЮСШОР №9, Воронеж (4-0). 2. БК СПАРТАК-ПРИМОРЬЕ, Владивосток (3-1). 3. СШОР №1 ЦЕНТРАЛЬНОГО РАЙОНА, Санкт-Петербург (2-2). 4. ДЮСШ Лидер, Тверь (1-3). 5. СШ по баскетболу им. В.И. Грекова, Чебоксары (0-4).
Старый Оскол
В этой группе выступала лучшая (по разности очков) команда Полуфинала 1: столичный СБК «Глория» выиграл 5 встреч с общей разницей «+224». А финишировавшую второй СШОР по баскетболу из Мытищ москвичи разгромили с двукратным перевесом (86:43). Любопытно, что у всех пяти остальных участников итоговая разница очков оказалась отрицательной. Тем не менее, подмосковные юноши выиграли 4 оставшиеся встречи, взяв верх в упорной борьбе и над хозяевами (60:58). Несмотря на эту неудачу, СШ «Юность» из Старого Оскола все равно вышла во второй Полуфинальный раунд – с третьего места. Решающей оказалась тяжелая победа над БК «Ильмер» (69:67).
1. СБК ГЛОРИЯ, Москва (5-0). 2. СШОР ПО БАСКЕТБОЛУ, Мытищи (4-1). 3. СШ ЮНОСТЬ, Старый Оскол (3-2). 4. БК Ильмер, Великий Новгород (2-3). 5. ДЮСШ, Коряжма (1-4). 6. СШОР Кировского района, Санкт-Петербург (0-5).
Золотая Коса
Вторая группа, в которой было только 5 участников: по финансовым причинам не смог сыграть БК «Волжанин» из Волжского. В ней развернулась самая отчаянная борьба за места в Полуфинале 2. Это, правда, не касается СДЮСШОР №1 Адмиралтейского района, которая выиграла все 4 матча с перевесом более 20 очков. Зато сразу три команды одержали по две победы. В заключительном туре СШОР №71 «Тимирязевская» необходимо было выиграть у химкинской СШОР №1 как минимум 6 очков. Однако москвичи взяли верх с минимальным перевесом (71:70), финишировав лишь на четвертой позиции.
1. СДЮСШОР №1 АДМИРАЛТЕЙСКОГО РАЙОНА, Санкт-Петербург (4-0). 2. СШОР №12, Волгоград (2-2, Л/В «+4»). 3. СШОР №1, Химки (2-2, «+3»). 4. СШОР №71 Тимиряевская, Москва (2-2, «-7»). 5. ДЮСШ №9, Ростов-на-Дону (0-4).
Самый яркий игрок: Иван Николаев (СДЮСШОР №1 Адмиралтейского района, Санкт-Петербург).
Курск
Вторая группа, где никто не обошелся ни без побед, ни без поражений. Ставшая первой СДЮСШОР №2 из Ярославля проиграла СШОР №1 Калининского района (60:71), но при этом нанесла единственное поражение ДЮСШ «ИВС» (65:60). Именно благодаря результату личной встречи ярославцы и опередили туляков. Перед последнем туром ситуация вообще была предельно ясной: 3 команды выиграли по три матча, еще 3 – по одному. И в самой последней игре «Калининская» позволила себе проиграть СШОР №56 (56:72).
1. СДЮСШОР №2, Ярославль (4-1, Л/В «+5»). 2. ДЮСШ «ИВС», Тула (4-1, «-5»). 3. СШОР №1 КАЛИНИНСКОГО РАЙОНА, Санкт-Петербург (3-2). 4. СШОР №56, Москва (2-3). 5. ДЮСШ по ИВС, Нижний Новгород (1-4, Л/В «+1»). 6. БК Русичи, Курск (1-4, «-1»).
Таким образом, сегодня стали известны все 30 команд, которые примут участие во втором Полуфинальном раунде.
Полуфинал 2
Команды, отобравшиеся по результатам Всероссийских соревнований «Путь сильнейших» (5): СШОР «Купчинский Олимп» (Санкт-Петербург), УОР №3 (Химки), СШОР «ЦСКА» (Москва), СШОР №49 «Тринта» им. Ю.Я. Равинского (Москва), ЦСП (Краснодар).
По результатам Полуфинала 1 (24): СДЮШОР «АлтайБаскет» (Барнаул), СДЮСШОР №6 им. В.И. Расторгуева (Томск), СДЮСШОР «ЦИВС» (Новосибирск), СШ «Старый Соболь» (Нижний Тагил), СДЮСШОР «Югория» им. А.А. Пилояна (Сургут), СШ №4 (Нижний Тагил), СДЮСШОР №9 (Воронеж), БК «Спартак-Приморье» (Владивосток), СШОР №1 Центрального района (Санкт-Петербург), БК «Калий-Баскет» (Березники), СДЮСШОР №2 «Красные Крылья» (Тольятти), СБСК «Самара» (Самара), СШОР №1 (Киров), СШОР «Олимпиец» (Пермь), БК «Купол-Родники» (Ижевск), СБК «Глория» (Москва), СШОР по баскетболу (Мытищи), СШ «Юность» (Старый Оскол), СДЮСШОР №1 Адмиралтейского района (Санкт-Петербург), СШОР №12 (Волгоград), СШОР №1 (Химки), СДЮСШОР №2 (Ярославль), ДЮСШ «ИВС» (Тула), СШОР №1 Калининского района (Санкт-Петербург).
Wild card согласно решению отдела по организации и проведению детско-юношеских соревнований (1): БК «Ильмер» (Великий Новгород).
Источник: Российская Федерация Баскетбола.
Поделиться
«Строитель»- 2002 выиграл у БК «Ильмер» из Великого Новгорода
В первом матче дополнительного полуфинала юношеского чемпионата России «Строитель»- 2002 выиграл у БК «Ильмер» из Великого Новгорода 77:45Игру у Строителя начали: Бурдилев — Бондаренко, Новиков — Киселев — Тверитин. На первой минуте «Ильмер» повел 4:1. Но после двух дальних попаданий Бондаренко и прохода Бурдилева Строитель выигрывал 9:4. В середине первой четверти Михаил Девятков выпустил другую пятерку игроков: Великий — Долгов, Морозов — Лаханов — Кулибакин. После чего Великий дальним броском увеличил перевес энгельсского клуба до 9 очков — 12:4. Затем игра выровнилась. Первый период завершился со счетом 23:15 в пользу Строителя.
Вторую четверть у покровчан начала пятерка Бурдилева. После четырех минут игры преимущество Строителя возросло до 16 очков — 32:16. В середине периода новгородской команде удалось отыграть 4 очка — 32:20. Затем в игру вступила пятерка Великого. На 6-ой минуте счет стал 37:22. Первая половина матча завершилась со счетом 39:24 в пользу Строителя.
Третий период у Строителя начала пятерка Бурдилева, где Тверитина заменил Лаханов. Шла равная игра. На 6-ой минуте волжанам удалось увеличить перевес до 17 очков. В концовке четверти покровчане забросили несколько мячей и еще больше оторвались от соперников. Третий период завершился со счетом 59:37 в пользу Строителя.
Заключительная четверть также прошла под диктовку покровчан. На 6-ой минуте они выигрывали 27 очков. Вскоре Новиков и Бондаренко забросили 3-очковые мячи, и счет стал 73:40. Матч завершился уверенной победой Строителя 77:45.
У Строителя очки набрали: Бондаренко 23, Лаханов 13, Новиков 10, Бурдилев и Морозов по 7, Киселев 6, Великий и Кулибакин по 5, Тверитин 1.
Подборы: Киселев 12, Морозов и Бурдилев по 7. Передачи: Великий 4, Бурдилев 3. Перехваты: Бондаренко 3. Блок-шоты: Киселев и Лаханов по 1
Игровое время: Новиков 24, Лаханов и Великий по 23, Бурдилев, Бондаренко и Киселев по 22, Кулибакин 17, Морозов 15, Долгов 13, Колчин 9, Тверитин 6, Прохоренко 4
Сегодня состоялось еще 2 матча. «РУНА — баскет» Москва уверенно обыграла ДЮСШ из Павловского Посада 86:32, команда из Нижнего Новгорода разгромила ДЮСШ города Орла 69:24.
Положение команд. 1 — 3 место ДЮБК «РУНА — баскет» Москва, «Строитель» Энгельс, ДЮСШ «Мещера» Нижний Новгород по 1 победе
4 — 6 место Великий Новгород, Павловский Посад и Орел по 1 поражению
Завтра в 12.15 Строитель сыграет с ДЮБК «РУНА — баскет» Москва
Фолы Потери «Коэффициент полезности» игрока
Заброшенные очки Разница очков Пропущенные очки
№ Команда Игры Средн. Всего № Команда Игры Средн. Всего № Команда Игры Средн. Всего
1 Акрон-Манеж (Великий 7 84,4 591 1 Акрон-Манеж (Великий 7 16,6 116 1 БК «ИЛЬМЕР» (Великий 6 65,3 392
2 ДИНАМО (Великий Новгород) 7 74,9 524 2 НОВОСТРОЙ (Великий 7 5,4 38 2 Акрон-Манеж (Великий 7 67,9 475
3 ИНЖСТРОЙ (Великий 7 73,9 517 3 БК «ИЛЬМЕР» (Великий 6 6,0 36 3 НОВОСТРОЙ (Великий 7 68,4 479
3 НОВОСТРОЙ (Великий 7 73,9 517 4 ДИНАМО (Великий Новгород) 7 2,3 16 4 ДИНАМО (Великий Новгород) 7 72,6 508
5 Металлург ОАО «БКО» 7 72,0 504 5 Металлург ОАО «БКО» 7 -0,9 -6 5 НовГУ (Великий Новгород) 7 72,7 509
6 НовГУ (Великий Новгород) 7 67,6 473 5 ИНЖСТРОЙ (Великий 7 -0,9 -6 6 Металлург ОАО «БКО» 7 72,9 510
7 БК «ИЛЬМЕР» (Великий 6 71,3 428 7 НовГУ (Великий Новгород) 7 -5,1 -36 7 Старая Русса (Старая Русса) 6 86,5 519
8 Старая Русса (Старая Русса) 6 60,2 361 8 Старая Русса (Старая Русса) 6 -26,3 -158 8 ИНЖСТРОЙ (Великий 7 74,7 523
Точность бросков с игры Точность 2-очковых бросков Точность 3-очковых бросков
№ Команда Игры З/В % № Команда Игры З/В % № Команда Игры З/В %
1 Металлург ОАО «БКО» 7 197/458 43,0 1 Металлург ОАО «БКО» 7 145/297 48,8 1 Металлург ОАО «БКО» 7 52/161 32,3
2 ИНЖСТРОЙ (Великий 7 207/493 42,0 2 БК «ИЛЬМЕР» (Великий 6 144/298 48,3 2 ДИНАМО (Великий Новгород) 7 47/186 25,3
3 Акрон-Манеж (Великий 7 241/577 41,8 3 Акрон-Манеж (Великий 7 215/451 47,7 3 ИНЖСТРОЙ (Великий 7 26/111 23,4
4 БК «ИЛЬМЕР» (Великий 6 164/393 41,7 4 ИНЖСТРОЙ (Великий 7 181/382 47,4 4 НовГУ (Великий Новгород) 7 31/142 21,8
5 ДИНАМО (Великий Новгород) 7 199/516 38,6 5 ДИНАМО (Великий Новгород) 7 152/330 46,1 5 БК «ИЛЬМЕР» (Великий 6 20/95 21,1
6 Старая Русса (Старая Русса) 6 155/402 38,6 6 НОВОСТРОЙ (Великий 7 164/367 44,7 6 Акрон-Манеж (Великий 7 26/126 20,6
7 НОВОСТРОЙ (Великий 7 192/515 37,3 7 Старая Русса (Старая Русса) 6 138/309 44,7 7 НОВОСТРОЙ (Великий 7 28/148 18,9
8 НовГУ (Великий Новгород) 7 180/521 34,5 8 НовГУ (Великий Новгород) 7 149/379 39,3 8 Старая Русса (Старая Русса) 6 17/93 18,3
11.03.2012
Чемпионат Новгородской области
по баскетболу среди мужских команд.
Точность штрафных бросков Голевые передачи Перехваты
№ Команда Игры З/В % № Команда Игры Средн. Всего № Команда Игры Средн. Всего
1 НОВОСТРОЙ (Великий 7 105/161 65,2 1 Акрон-Манеж (Великий 7 21,4 150 1 Акрон-Манеж (Великий 7 16,9 118
2 БК «ИЛЬМЕР» (Великий 6 80/124 64,5 2 ДИНАМО (Великий Новгород) 7 16,4 115 2 ИНЖСТРОЙ (Великий 7 13,7 96
3 ИНЖСТРОЙ (Великий 7 77/123 62,6 3 ИНЖСТРОЙ (Великий 7 14,4 101 3 НовГУ (Великий Новгород) 7 12,4 87
4 НовГУ (Великий Новгород) 7 82/131 62,6 4 НОВОСТРОЙ (Великий 7 14,1 99 4 НОВОСТРОЙ (Великий 7 11,9 83
5 Металлург ОАО «БКО» 7 58/95 61,1 5 БК «ИЛЬМЕР» (Великий 6 14,7 88 5 БК «ИЛЬМЕР» (Великий 6 13,7 82
6 ДИНАМО (Великий Новгород) 7 79/130 60,8 5 НовГУ (Великий Новгород) 7 12,6 88 6 ДИНАМО (Великий Новгород) 7 8,7 61
7 Акрон-Манеж (Великий 7 83/143 58,0 7 Металлург ОАО «БКО» 7 10,3 72 7 Металлург ОАО «БКО» 7 7,7 54
8 Старая Русса (Старая Русса) 6 34/67 50,7 8 Старая Русса (Старая Русса) 6 10,8 65 8 Старая Русса (Старая Русса) 6 7,5 45
Блокшоты Подборы (всего) Подборы на своем щите
№ Команда Игры Средн. Всего № Команда Игры Средн. Всего № Команда Игры Средн. Всего
1 ДИНАМО (Великий Новгород) 7 3,0 21 1 НовГУ (Великий Новгород) 7 44,7 313 1 НовГУ (Великий Новгород) 7 27,3 191
2 Акрон-Манеж (Великий 7 2,7 19 2 Акрон-Манеж (Великий 7 43,4 304 2 НОВОСТРОЙ (Великий 7 26,9 188
2 БК «ИЛЬМЕР» (Великий 6 3,2 19 3 ДИНАМО (Великий Новгород) 7 43,1 302 3 Акрон-Манеж (Великий 7 26,0 182
4 Металлург ОАО «БКО» 7 2,0 14 4 ИНЖСТРОЙ (Великий 7 41,3 289 4 ДИНАМО (Великий Новгород) 7 25,9 181
5 НовГУ (Великий Новгород) 7 1,7 12 5 НОВОСТРОЙ (Великий 7 39,9 279 5 ИНЖСТРОЙ (Великий 7 24,6 172
6 ИНЖСТРОЙ (Великий 7 1,4 10 6 Металлург ОАО «БКО» 7 37,0 259 6 Металлург ОАО «БКО» 7 24,1 169
7 НОВОСТРОЙ (Великий 7 0,9 6 7 Старая Русса (Старая Русса) 6 37,8 227 7 Старая Русса (Старая Русса) 6 25,0 150
8 Старая Русса (Старая Русса) 6 0,2 1 8 БК «ИЛЬМЕР» (Великий 6 37,0 222 8 БК «ИЛЬМЕР» (Великий 6 24,3 146
11.03.2012
Чемпионат Новгородской области
по баскетболу среди мужских команд.
Подборы на чужом щите % подборов на своем щите % подборов на чужом щите
№ Команда Игры Средн. Всего № Команда Игры СЩ/ПВ % № Команда Игры ЧШ/ПВ %
1 Акрон-Манеж (Великий 7 17,4 122 1 НовГУ (Великий Новгород) 7 191/293 65,2 1 ИНЖСТРОЙ (Великий 7 117/263 44,5
1 НовГУ (Великий Новгород) 7 17,4 122 2 ИНЖСТРОЙ (Великий 7 172/268 64,2 2 ДИНАМО (Великий Новгород) 7 121/306 39,5
3 ДИНАМО (Великий Новгород) 7 17,3 121 3 Металлург ОАО «БКО» 7 169/265 63,8 3 Акрон-Манеж (Великий 7 122/314 38,9
4 ИНЖСТРОЙ (Великий 7 16,7 117 4 Старая Русса (Старая Русса) 6 150/236 63,6 4 НовГУ (Великий Новгород) 7 122/327 37,3
5 НОВОСТРОЙ (Великий 7 13,0 91 5 ДИНАМО (Великий Новгород) 7 181/286 63,3 5 Металлург ОАО «БКО» 7 90/242 37,2
6 Металлург ОАО «БКО» 7 12,9 90 6 БК «ИЛЬМЕР» (Великий 6 146/234 62,4 6 БК «ИЛЬМЕР» (Великий 6 76/215 35,3
7 Старая Русса (Старая Русса) 6 12,8 77 7 Акрон-Манеж (Великий 7 182/295 61,7 7 Старая Русса (Старая Русса) 6 77/233 33,0
8 БК «ИЛЬМЕР» (Великий 6 12,7 76 8 НОВОСТРОЙ (Великий 7 188/318 59,1 8 НОВОСТРОЙ (Великий 7 91/295 30,8
Фолы Потери «Коэффициент полезности» игрока
№ Команда Игры Средн. Всего № Команда Игры Средн. Всего № Команда Игры КПИ
1 Металлург ОАО «БКО» 7 20,6 144 1 БК «ИЛЬМЕР» (Великий 6 22,5 135 1 Акрон-Манеж (Великий 7 0,53
2 Акрон-Манеж (Великий 7 19,7 138 1 ДИНАМО (Великий Новгород) 7 19,3 135 2 ДИНАМО (Великий Новгород) 7 0,44
3 ИНЖСТРОЙ (Великий 7 19,6 137 3 НОВОСТРОЙ (Великий 7 19,4 136 3 НОВОСТРОЙ (Великий 7 0,42
4 НовГУ (Великий Новгород) 7 17,0 119 4 Акрон-Манеж (Великий 7 19,6 137 4 БК «ИЛЬМЕР» (Великий 6 0,41
5 БК «ИЛЬМЕР» (Великий 6 18,3 110 5 Старая Русса (Старая Русса) 6 23,8 143 5 ИНЖСТРОЙ (Великий 7 0,40
6 ДИНАМО (Великий Новгород) 7 14,7 103 6 Металлург ОАО «БКО» 7 22,7 159 6 НовГУ (Великий Новгород) 7 0,33
7 НОВОСТРОЙ (Великий 7 14,6 102 7 ИНЖСТРОЙ (Великий 7 23,9 167 7 Металлург ОАО «БКО» 7 0,29
8 Старая Русса (Старая Русса) 6 12,5 75 8 НовГУ (Великий Новгород) 7 27,0 189 8 Старая Русса (Старая Русса) 6 0,24
11.03.2012
В Москве стартовал финал Первенства России по баскетболу среди спортсменов 2005 г.р.
ПРОГРАММА СОРЕВНОВАНИЙ
Вторник, 7 мая
Группа Б
10:00
ДЮСШ №3 им. А.Д. Мышкина (г. Екатеринбург) — СШОР №56 (г. Москва)
12.00
СШОР №49 «Тринта» им. Ю.Я.Равинского (г. Москва) — СШОР по баскетболу Московская область, г. Мытищи)
Группа В
10.00
СШОР «ЦСКА» (г. Москва) — БК «Ильмер» — СШОР «Манеж» (г. Великий Новгород)
12.00
СШ «Старый Соболь» (г. Нижний Тагил) — СШОР №1 (Московская область, г. Химки)
Группа А
15.00
СШОР «Купчинский Олимп» (г. Санкт-Петербург) — СШОР «Юность Москвы» по баскетболу «Динамо» (г. Москва)
17.00
БК «Калий-Баскет» (г. Березники) — СШОР №12 (г. Волгоград)
Группа Г
15.00
СШОР «Олимпиец» (г. Пермь) — СШОР №7 (г. Нижний Новгород)
17.00
ДЮБК «Руна-баскет» (г. Москва) — СШОР №1 Адмиралтейского района (г Санкт-Петербург)
Среда, 8 мая
Группа Б
10:00
СШОР по баскетболу ( Московская область, г. Мытищи) — ДЮСШ №3 им. А.Д. Мышкина (г. Екатеринбург)
12.00
СШОР №56 (г. Москва) — СШОР №49 «Тринта» им. Ю.Я.Равинского (г. Москва)
Группа В
10.00
СШОР №1 ( Московская область, г. Химки) — СШОР «ЦСКА» (г. Москва)12.00
БК «Ильмер» — СШОР «Манеж» ( г. Великий Новгород) — СШОР «Купчинский Олимп» (г. Санкт-Петербург)
Группа А
15.00
СШОР №12 (г. Волгоград) — СШОР «Купчинский Олимп» (г. Санкт-Петербург)
17.00
СШОР «Юность Москвы» по баскетболу «Динамо» (г. Москва) — БК «Калий-Баскет» (г. Березники)
Группа Г
15.00
СШОР №1 Адмиралтейского района (г. Санкт-Петербург) — СШОР «Олимпиец» (г. Пермь)
17.00
СШОР №7 (г. Нижний Новгород) — СШОР по баскетболу (Московская область, г. Мытищи)
Четверг, 9 мая
Группа Б
10.00
СШОР №56 (г. Москва) — СШОР по баскетболу (Московская область, г. Мытищи)
12.00
СШОР №49 «Тринта» им. Ю.Я.Равинского (г. Москва) — ДЮСШ №3 им. А.Д. Мышкина (г. Екатеринбург)
Группа В
10.00
СШОР «ЦСКА» (г. Москва) — СШ «Старый Соболь» (г. Нижний Тагил)
12.00
СШОР №1 (Московская область, г. Химки) — БК «Ильмер» — СШОР «Манеж» (г. Великий Новгород)
Группа А
15.00
СШОР «Юность Москвы» по баскетболу «Динамо» (г. Москва) — СШОР №12 (г. Волгоград)
17.00
БК «Калий-Баскет» (г. Березники) — СШОР «Купчинский Олимп» (г. Санкт-Петербург)
Группа Г
15.00
СШОР «Олимпиец» (г. Пермь) — ДЮБК «Руна-баскет» (г. Москва)
17.00
СШОР №1 Адмиралтейского района (г. Санкт-Петербург) — СШОР №7 (г. Нижний Новгород)
Суббота, 11 мая
1/8 финала
Воскресенье, 12 мая
¼ финала
Понедельник, 13 мая
½ финала
Вторник, 14 мая
Финал
404 Seite nicht gefunden
- Дом
- НОВОСТИ 2021
- Партнер
- Назад
- Land & Hof
- Назад
- Schneeketten
- Ильмер Машиненбау
- Реформа
- Эби Шмидт
- Патура
- Открытый и Jagd
- Назад
- Охотник на оленей
- Мархур Охота
- Forst & Garten
- Назад
- Husqvarna
- Forstketten
- Hafo Forsttechnik
- Курильщик и гриль
- Назад
- Брэдли Смокер
- KamadoJOE
- Мастерская
- Услуга
- Назад
- Услуга
- E-Teile
- Impressum
- Назад
- Impressum
- Datenschutz
- Allgemeine Geschäftsbedingungen
- Kontakt
- Убер унс
- Zum Shop
© 2021 г.
На платформе Gantry Framework(PDF) Улучшенный метод выделения кардиомиоцитов новорожденных крыс с повышенным выходом C-Kit + сердечных клеток-предшественников
Образец цитирования: Rutering J, Ilmer M, Recio A, Coleman M, Vykoukal J, et al.(2015) Улучшенный метод выделения кардиомиоцитов новорожденных крыс с повышенным выходом клеток-предшественников C-Kit +
. J Stem Cell Res Ther 5: 305. doi: 10.4172 / 2157-7633.1000305
Страница 7 из 8
Том 5 • Выпуск 9 • 1000305
J Stem Cell Res Ther
ISSN: 2157-7633 JSCRT, открытый доступ журнал
Конфликт интересов
MC и Э.А. связаны с InGeneron, Inc., Хьюстон, Техас, США.
Благодарности
Эта работа финансировалась Альянсом исследователей сердечно-сосудистой системы (Э.А.).
М.И. был поддержан программой стипендий для докторантов Немецкого академического научного обмена
(DAAD). Данные FACS были получены Центром цитометрии и визуализации клеток Flow
(FCCI) Центра рака
доктора медицины Андерсона, который финансируется грантом поддержки онкологического центра NCI P30CA16672.
Ссылки
1. Браунвальд Э., Бристоу М.Р. (2000) Застойная сердечная недостаточность: 50 лет
прогресса.Тираж 102: IV14-23. [PubMed]
2. Soonpaa MH, Field LJ (1998) Обзор исследований, изучающих синтез ДНК кардиомиоцитов у млекопитающих
. Цирк Res 83: 15-26. [PubMed]
3. Walsh S, Pontén A, Fleischmann BK, Jovinge S (2010) Контроль клеточного цикла кардиомиоцитов
и оценка роста in vivo — анализ на основе ядер кардиомиоцитов
. Cardiovasc Res 86: 365-373. [PubMed]
4. Поррелло Э. Р., Махмуд А. И., Симпсон Э., Хилл Дж. А., Ричардсон Дж. А. и др.(2011)
Переходный регенеративный потенциал сердца новорожденных мышей. Наука 331:
1078-1080. [PubMed]
5. Bearzi C, Rota M, Hosoda T., Tillmanns J, Nascimbene A, et al. (2007) Человеческие
сердечные стволовые клетки. Proc Natl Acad Sci U S A 104: 14068-14073. [PubMed]
6. Hosoda T (2012) C-kit-позитивные сердечные стволовые клетки и регенерация миокарда.
Am J Cardiovasc Dis 2: 58-67. [PubMed]
7. Смарт Н., Боллини С., Дубе К.Н., Виейра Дж. М., Чжоу Б. и др.(2011) De novo
кардиомиоцитов из активированного сердца взрослого после травмы. Природа 474:
640-644. [PubMed]
8. Бергманн, Бхардвай Р.Д., Бернар С., Здунек С., Барнабе-Хейдер Ф. и др.
(2009) Доказательства обновления кардиомиоцитов у людей. Наука 324: 98-102.
[PubMed]
9. Hsieh PC, Segers VF, Davis ME, MacGillivray C, Gannon J, et al. (2007)
Данные исследования генетического картирования судеб, свидетельствующие о том, что стволовые клетки обновляют взрослые
кардиомиоциты млекопитающих после травмы.Нат Мед 13: 970-974. [PubMed]
10. Кайстура Дж., Урбанек К., Перл С., Хосода Т., Чжэн Х. и др. (2010)
Кардиомиогенез в сердце взрослого человека. Цирк Res 107: 305-315. [PubMed]
11. Мессина Е., Де Анжелис Л., Фрати Дж., Моррон С., Чименти С. и др. (2004) Выделение
и размножение взрослых сердечных стволовых клеток из сердца человека и мыши. Circ
Res 95: 911-921. [PubMed]
12. Бельтрами А.П., Барлуччи Л., Торелла Д., Бейкер М., Лимана Ф. и др.(2003) Взрослые
сердечные стволовые клетки мультипотентны и поддерживают регенерацию миокарда. Ячейка
114: 763-776. [PubMed]
13. He J-Q, Vu D, Hunt G, Chugh A, Bhatnagar A, et al. (2011) Human Cardiac
Стволовые клетки, выделенные из придатков предсердий, стабильно экспрессируют c-kit. PLoS ONE
6: e27719. [PubMed]
14. Мацуура К., Нагаи Т., Нишигаки Н., Ояма Т., Ниси Дж. И др. (2004) Взрослые сердечные
Sca-1-положительные клетки дифференцируются в бьющиеся кардиомиоциты.J Biol Chem 279:
11384-11391. [PubMed]
15. Лаугвиц К.Л., Моретти А., Лам Дж., Грубер П., Чен Ю. и др. (2005) Постнатальные кардиобласты isl1 +
входят в полностью дифференцированные клоны кардиомиоцитов. Nature 433: 647-
653. [PubMed]
16. Дейхдашк Д., Хан Л., Бауэр М., Санада Ф., Оикономопулос А. и др. (2013)
Рассмотрение молекулярных взаимоотношений между различными кардиогенными клетками-предшественниками
. Исследование обращения 112: 1253–1262.
17. Magenta A, Avitabile D, Pompilio G, Capogrossi MC (2013) c-kit-Positive
сердечные клетки-предшественники: сердце стволовости. Цирк Res 112: 1202-1204.
[PubMed]
18. Ellison GM, Vicinanza C, Smith AJ, Aquila I, Leone A, et al. (2013) Взрослые
c-kit (pos) кардиальные стволовые клетки необходимы и достаточны для функциональной регенерации и восстановления сердечной
. Ячейка 154: 827-842. [PubMed]
19. Powell TT (1976) Быстрая методика выделения и очистки взрослых
клеток сердечной мышцы, имеющих респираторный контроль и толерантность к кальцию.
Сообщество биохимических биофизических исследований 72: 327–333.
20. LaFramboise WA, Scalise D, Stoodley P, Graner SR, Guthrie RD, et al. (2007)
Сердечные фибробласты влияют на фенотип кардиомиоцитов in vitro. Am J Physiol
Cell Physiol 292: C1799-1808. [PubMed]
21. Dispersyn G, Geuens E, Donck Lver, Ramaekers F, Borgers M (2001) Взрослые
кардиомиоциты кролика подвергаются дедифференцировке, подобной гибернации, когда co-
культивируется с сердечными фибробластами.Сердечно-сосудистые исследования 51: 230–240.
22. Sadat S, Gehmert S, Song YH, Yen Y, Bai X и др. (2007) Кардиозащитный эффект
мезенхимальных стволовых клеток опосредуется IGF-I и VEGF. Biochem
Biophys Res Commun 363: 674-679. [PubMed]
23. Metzele R, Alt C, Bai X, Yan Y, Zhang Z, et al. (2011) Стволовые клетки, полученные из жировой ткани человека
, проявляют потенциал пролиферации и спонтанное ритмическое сокращение
после слияния с кардиомиоцитами новорожденных крыс.Журнал FASEB
25: 830–839.
24. Louch WE, Sheehan KA, Wolska BM (2011) Методы выделения кардиомиоцитов
, культивирование и перенос генов. J Mol Cell Cardiol 51: 288-298. [PubMed]
25. Ицхаки-Алла А., Леор Дж., Раанани Е., Стерник Л., Шпигельштейн Д. и др. (2009)
Характеристики пациента и источник клеток определяют количество изолированных клеток-предшественников сердца человека
. Тираж 120: 2559-2566. [PubMed]
26.Мориско С., Зебровски Д., Кондорелли Г., Цихлис П., Ватнер С. и др. (200) Путь
Akt-гликоген-синтаза-киназа 3 регулирует транскрипцию предсердного
натрийуретического фактора, индуцируемого стимуляцией b-адренергического рецептора в миоцитах сердца
. Журнал биологической химии 275: 14466–14475.
27. Sreejit P, Kumar S, Verma RS (2008) Улучшенный протокол для первичной культуры
кардиомиоцитов новорожденных мышей. In vitro Cell Dev Biol Anim 44: 45-50.
[PubMed]
28. Голден HB, Голлапуди Д., Герилечаогету Ф., Ли Дж., Cristales RJ и др. (2012)
Выделение сердечных миоцитов и бробластов новорожденных крысят. Методы
Mol Biol 843: 205-214. [PubMed]
29. Элер Э, Мур-Моррис Т., Ланге С. (2013) Выделение и культивирование неонатальных
кардиомиоцитов мыши. J Vis Exp. [PubMed]
30. Chlopcíková S, Psotová J, Miketová P (2001) Кардиомиоциты новорожденных крыс —
— модель для изучения морфологических, биохимических и электрофизиологических
характеристик сердца.Biomed Pap Med Fac Univ Palacky Olomouc
Чешская Республика 145: 49-55. [PubMed]
31. Герилечаогету Ф., Фенг Х., Голден HB, Низамутдинов Д., Фостер Д.М. и др. (2013)
Производство кальция в тканях сердца спонтанно бьющихся новорожденных крыс и исследования сократимости
. Методы Mol Biol 1066: 45-56. [PubMed]
32. Блондель Б., Ройен И., Ченеваль Дж. П. (1971) Клетки сердца в культуре: простой метод
для увеличения доли миобластов.Experientia 27: 356-358. [PubMed]
33. Zhang Y, Li TS, Lee ST, Wawrowsky KA, Cheng K, et al. (2010) Дедифференцировка
и пролиферация кардиомиоцитов млекопитающих. PLoS One 5: e12559.
[PubMed]
34. Симпсон П., Савион С. (1982) Дифференциация миоцитов крысы в одноклеточных культурах
с пролиферирующими немиокардиальными клетками и без них. Поперечные полосы, ультраструктура
и хронотропный ответ на изопротеренол. Тираж
Research 50: 101–116.
35. Иваки К., Сухатмен В., Шубейта Х, Чиен К. (1990) а- и бета-адренергические
Стимуляция индуцирует отчетливые паттерны экспрессии немедленных ранних генов в миокардиальных клетках новорожденных крыс
. Журнал биологической химии 265: 13809–
13817.
36. Матущак С., Чапла Дж., Ярош-Бей М., Вианевска Е., Цихоа Т. и др. (2014)
Характеристика клеток-предшественников c-Kit + в эксплантированных сердцах человека. Clin Res
Cardiol 103: 711-718.[PubMed]
37. Мишра Р., Виджаян К., Коллетти Е.Дж., Харрингтон Д.А., Маттисен Т.С. и др. (2011)
Характеристика и функциональность сердечных клеток-предшественников врожденного сердца
пациент. Тираж 123: 364-373. [PubMed]
38. Simpson DL, Mishra R, Sharma S, Goh SK, Deshmukh S, et al. (2012) A
сильная регенеративная способность сердечных стволовых клеток, полученных из сердца новорожденных.
Тираж 126: S46-53. [PubMed]
39.Nguyen P, Hsiao S, Sivakumaran P, Lim S, Dilley R (2012) Обогащение
кардиомиоцитов новорожденных крыс в первичной культуре способствует долгосрочному поддержанию
сократимости in vitro. AJP: Клеточная физиология 303: C1220.
40. Meuser-Batista M, Correa JR, Soares MJ, Henriques-Pons A (2008) Изоляция
тучных клеток сердца при экспериментальной инфекции Trypanosoma cruzi. Тканевая клетка
40: 309-316. [PubMed]
Средняя школа Фебуса — Ежегодник Spectre (Хэмптон, Вирджиния), класс 1987 года, страница 160 из 184 (110096)
Средняя школа Фебуса — Ежегодник Spectre (Хэмптон, Вирджиния), класс 1987 года, страница 160 из 184 ( 110096)— Класс 1987 г. | Страница160 из 184 |
Страница 160 из 184 | Предыдущая страница | Ищите одноклассников, друзей и родственников в одной изкрупнейших коллекций онлайн-ежегодников! Ваше членство в E-Yearbook.com предоставляет следующие преимущества:
|
Page 160 текст:
«Миссия ccomp A zJ, c A zz tz zzf z ‘uz fz JcrzAz Ay AlZ Aoz zi zzzzzuAzzzf z Afz r zzrzzi Zz zyiA’ z МОРСКОЙ КОРПУС JUNIOR RESERVZ OFFICERS ‘TRAIN tzJ _ z zt YAL zz z V NAVMC 7039R ■ A rnt z ‘.A zAz az-ij ■ Afi fzzr z ‘i mJC: 1: Wafor J4. К. Валентайн, О. Вилли и др., Цинфилл У. Пернелл К. Вау, 2). one., V.% .ler, A. JJopUs, W. BoP, O. Jittle, B. CoLon. ecu, 2: C.JLander, j ?. Jim, V. Breedlove, J. Williams, J. J no., C. Blackleg, W. omei, V. lenolds, Ji. jCainq, P.V (индред. Pow 3: S. ‘tjacconi, Ji. Craddox, S. Bone, 2. Jdatchinion, B. Vdawlzini, J (. Qilliam, 2. rJlalon, (d. zdt ers, dd. Bimpion, y 4. Paterkii, 2). LAJillzini, 2). BorlzeS, P. Bennett. Pow 4: P.% {Jaikington, Bdai ei, fl.Бод, П. Джи Дж. П. Джефферс, 2). Кловер, Б. У. Клир, Б. Джасситер, К. Джок, 2). Cjoddard, B. Critzer. Поу. 5: Дж. FlkJJiffe, 2). Peed, W. Bkarp, ji. Jduffman, W. dbavis, JJ. B num, P. ddletcker, B. Jordon, B. Btaton, Jd. Ильмер, П. Брайант, Cj. Bk awy J.3 enLinS. ie02C IZou, I, S. Wa i.r, J. S. V. X C. Weatkerford, 2. Qikki, WQtjBQB A. jC. Бейнс. Pow 2; Дж. Фкельсон, Б. Пандер, В. Блэклег, В. Иогерс, П. Калкун, Б. Олстон, _2. Дженнингс, К. Верритт, В. Уолтон. Pow 3: B (. Qodfreg, J. Ckapman, Brim, B.Bdarrison, J. Mien, A. Mmondiva, C. Williams, W. Trunge% Ueai er. ow 4 5.% (или. HQ Qri „. ,, W. J„ n., S. Jtarr: ,, .., J. V. 2 au, J. 5 1 orn ton, 2. BdimeS, B. WancillaS, 2. Wilson. Pow 5: B (. Bmitk, O. Cox, C. ydllen, 2. Bdooks, _2. Pickards, C. 7lhleS, 2 Alexander, B. Joknson, 2. plover, A. Jones, J Погерс, Б. Пугк.
» Показать Скрыть текст предыдущей и следующей страницы ( OCR )Page 159 текст:
«oreiqn Jlanqua e Ciui; лл 1: Сэдир, 2).flgu en, 2). lAJ nn, Wl. fl u en, J ?. Санзо. поток 2: Пт. горелка, сленги, IJ. (iton, ‘ll !. JdeJden, JC Tlevide, J (. V. bonnefi, C. WJLr, W. Da Lr, €. CaULo, f). J Jin, C. Oran, JJ. flgu en, J (. IVafLr, J. CLrH. K ou 3.- X Cranfift, C. Oaltrenltrug, P. Scott, ‘W. Qatfin, Wh Seifieid, X. Summeri, X. Vu, 0 (., T oUee, J. 0 (im , C. Breen, _2. Christian, hd. Ournre. Поток 4: Cia ton, B. Brown, Q. Pane, X. Charnoch, S. Scott, Oitzqeraid, S. 0 (e (teif, O. • Даффин, П. Брекгс, Дж. Ораонк, X. Кристиан, 711.Branch, C. Schmeitzer, iohnson, O. Smith, поток 5: le. Стэггс, Уивер, Дж. Xassiter, B. Sheffier, X. Strandcfvist, C. JderncJi, S. Crum, X. Q ‘reene, VI X (.et (tf, S. ntofich, SC. Schuitheis, O. Cmano. Kdow 6; C. Washington , O. Wattace, 0 (. Xdoiiowa, O. Xdoiowai, V., Piester, Xeei, S. James, V. Jones, X. Carr, X. Richardson, Q. -Aver, X. Watt, 7], Tfjaust , Patei, Tfl. West. 71, на фото; X. Jdarper. Junior ClassicalXeague: Row 1; B. ardner (президент), W. Jdedden, TV. Orazier, S. J ell; f, R.Смит, Дж. Класье. Ряд 2; J. Stages (вице-президент), Od .. Cason, O. Coleman, J. Barhle, O. Oaucette, Od. ра (секретарь). Ряд 3; X. Чайнам, Б. Шарп, Дж. Бигелоу, X. Орухарт. f] или на фото: Wr. Rri или (спонсор), S. X aggS (OreaSurer), О. Бигелоу (Xdistorian). Миссия ccomp Ccologg Cluh; Ряд 1; Вичи Сиекайр, Х) Аун Рудг, Ратрис Крвин, Бен Зи, Тлга Ран. Строка 2: Mhert Qaehe, TVatt J (ane, Jared X aughtrg, Ouwanna Sgcamore, Vihi Shelton, 7VrS. Oucher. Строка 3: Clarence Jllen, Mam Bigelow, Brian Qo f, Susan WcMliffe, Steven Sherman, M me d X uhoSe). .S .X.X .: Row .. 7Ve ft Met ctelie Aecretaf j, a offie Wanton, CinJtf Smith, Xi Sa Bowman (президент). Ряд 2; Тренер WeSadden, Samm reen, Br end a Richardson, TVarilgn ardner, lenda Richardson, Shari James, Xonald Watt (вице-президент). 155
”Page 161 текст:
“CoL Quarl O one Xittie, Sam WafU WicLei Parnell, einalJ Sletcker. WQfeOSC 2 rill Seam: Pou: 1: Стивен Лаккони, Воника Слакуэ, Джилен Сынум, Скереааалле ноид и Сена Иккд, Сэм Ла Джалкер, YVI ‘S £. tjC.Сайней. Pow 2: Sarrt Pimpie, AJilliam Skarp, Siaw ne Sorkei, YHjattkew S ane, Uaugkn Sreedlove, Peggie Sletcker, Sgrone Jittle, Wickael Parnell (не skown: eorge Pagnej. Pifle Seam: Pow 1: immie Skarp im, Qreg Pranfill (капитан), Srgan Cokoon, Steven ‘IJacconi. Pow 2: Qreg Sk aw, Serrance Sa glor, Wai или S4arrg P. Valen tine, Pkarlei Sgeri, S evin Smitk. 157
»Предложения в средней школе Фебуса — Коллекция Spectre Yearbook (Хэмптон, Вирджиния):
Найдите и ищите ежегодники в Интернете сегодня!
НАЙТИ ДРУЗЕЙ И КЛАССА | ГЕНЕАЛОГИЧЕСКИЙ АРХИВ | ПЛАНИРОВАНИЕ Воссоединения |
Вы пытаетесь найти старых школьных друзей, старых одноклассников, сослуживцев или товарищей по кораблю? Вы хотите увидеть прошлых подруг или парней? Оживите возвращение на родину, выпускной бал, выпускной и другие моменты в кампусе, запечатленные в фотографиях из ежегодника.Вернитесь к своему братству или женскому обществу и посетите знакомые места. Увидеть членов старых школьных клубов и пережить старые времена. Начни поиск сегодня! | Ищете старых членов семьи и родственников? Вы хотите найти фотографии родителей, бабушек и дедушек, когда они учились в школе? Хотите узнать, какая прическа была популярна в 1920-е годы? E-Yearbook.com содержит обширную информацию по генеалогии, охватывающую более века, для многих школ с полнотекстовым поиском. Воспользуйтесь нашим онлайн-ресурсом по генеалогии, чтобы быстро открыть для себя историю! | Вы планируете воссоединение и вам нужна помощь? Электронный ежегодник.com может помочь вам со сканированием и предоставлением доступа к изображениям ежегодников для рекламных материалов и мероприятий. Мы можем предоставить вам электронную версию вашего ежегодника, которая поможет вам в планировании воссоединения. E-Yearbook.com также будет публиковать изображения ежегодника в Интернете, чтобы люди могли ими поделиться и насладиться ими. |
Erzählcafe 2018 — NS Zeitzeugen
Zeitzeugen des II. Weltkriegs berichten vor Schülern des Herwig-Blankertz-BKs über ihre Erlebnisse als NS-Verfolgte
«Ich freue mich, dass so viele junge Leute hier sind um meine Geschichte zu hören», grüßt Abram Ilmer die Schülerinnen und Schüler des Herwig-Blankertz-Berufskollegs im Erzählcafé в Реклингхаузене.Der 87jährige Ilmer ist Russe und einer von vielen Zeitzeugen, die anschaulich und bewegend von ihren Schicksalen während des II. Weltkriegs erzählen. Organisiert werden diese Begegnungen mehrmals im Jahr durch den Bundesverband für NS-Verfolgte.
Am Mittwoch, den 11.04. lauschten Abiturienten und Fachabiturienten der 12. Klasse den Erlebnissen von Abram Ilmer, der als Elfjähriger kurz nach Ausbruch des Krieges mit seinen drei kleinen Geschwistern und seiner Mutter in Weißatenrussarschen Oschor den e mutter.Als Menschen jüdischen Glaubens waren sie in ihrem Heimartort nicht mehr sicher, sodass sie mehrere tausend Kilometer im Zug, zu Fuß und im Pferdefuhrwerk überwinden mussten. Angst, Kälte, Krankheit, Hunger und die Bedrohung durch Bomben waren ständige Begleiter. Erst nach der Befreiung durch die rote Armee 1944 konnten sie in ihre Heimat zurückkehren. Ilmers Vater kehrte jedoch nie aus dem Krieg zurück.
Trotz der negativen Erlebnisse entschieden sich Ilmers Kinder 1998 dazu, nach Recklinghausen auszuwandern.Abram Ilmer folgte ihnen — nicht zuletzt, weil er bei Kindern und Enkelkindern sein wollte. Vielleicht ein letzter Schritt, um sich mit der Geschichte seiner Kindheit auszusöhnen. Für die hier lebenden Menschen eine Gelegenheit, sich in generationenübergreifenden Gesprächen auszutauschen und die Geschichte des eigenen Landes besser zu verstehen.
«Es war eine sehr interessante Begegnung, da wir eine andere Perspektive auf die NS-Geschichte bekommen haben», äußert sich die angehende Erzieherin Marion Bartsch anschließend begeistert.Genau dieser Aspekt liegt Ilmer am Herzen, wenn er die Schüler mit den Worten verabschiedet, sie mögen stets mehrere Blickwinkel einnehmen und Quellen überprüfen, wenn es um die Darstellung von geschichtlichen Ereignissen getlichen.
Erzählcafe 2018
Продам bk 280 б / у
ВсеТракторы
Тракторы Узкоколейные тракторы / минитракторы Лесохозяйственные тракторы Коммунальные тракторы Ветеранский трактор Unimog Квадроциклы Фронтальный погрузчик Масса Навесное оборудование для фронтальных погрузчиков Задние погрузчики / транспортные ящики Шины Диски Колеса Резиновые гусеницы Оси Системы GPS / Точное земледелие Электронные компоненты Принадлежности для тракторов / КомпонентыКомбайны
Комбайны Комбайны Комбайны / кормоуборочные комбайны Самоходные кормоуборочные комбайны Прицепные / навесные кормоуборочные комбайны Принадлежности для комбайнов и кормоуборочных комбайнов Пресс-подборщики Обмотчики тюков Кормоуборочные прицепы / силосные системы Свеклоуборочное оборудование CCM / зерновые мельницы Оборудование для уборки капусты Лукоуборочные комбайны ботворезы для цветочных луковиц Подъёмники для цветочных луковиц Сборщики бобов Уборочные комбайны для салата Лук-порей Уборочные комбайны Морковоуборочные комбайны Вороховщики для гороха Прицеп для уборки винограда Гусеницы для уборки резиновых гусениц Системы GPS / Точное земледелие E лектронные компоненты Прочие принадлежности для комбайнов Прочие комбайныОбработка почвы
Плуги Культиватор Дисковые бороны Компактные диски Роторные бороны Глубокорыхлитель Лопаточные машины Роторные бороны Роторные корчеватели Ротор с зубчатым ротором Роторная борона Роторная культивация Посевная комбинация Прижимы Вальцы Травяные катки Скребки Соломенная борона Корончатая культиватор / рыхлитель Прочие культиваторыСеялки / сеялки
Сеялки Сеялки точного высева Сеялки Дополнительные сеялки Принадлежности / прочие сеялки / сеялкиРазбрасыватели / опрыскиватели удобрений
Разбрасыватели удобрений Принадлежности для опрыскивателей / другое оборудование для внесения удобренийРазбрасыватели жидкого навоза и навоза
Разбрасыватели навоза / компоста Прочие разбрасыватели навоза / компоста Цистерны для жидкого навоза Самоходные разбрасыватели жидкого навоза Разбрасыватели жидкого навоза Дисковая борона для жидкого навоза Культиватор для жидкого навоза Инжектор для жидкого навоза Дисковый инжектор для жидкого навоза Смесители для жидкого навоза Контейнеры для жидкого навоза Сепараторы жидкого навоза Другое оборудование для пульпыОросительные / дренажные системы
Системы орошения Насосы для орошения Двигатели для орошения Ирригатор Трубки / шланги Системы дренажа Принадлежности / другие системы орошенияКартофель
Картофельные сеялки Опрыскиватели картофеля Картофелеуборочные комбайны Техника для хранения картофеля / системы обработки картофеля Дестунер / грядка Принадлежности / другое картофельное оборудованиеФруктовый сад и виноградник
Узкоколейные тракторы / минитракторы Роторная культивация Сабельная борона Лубовидный ротор Ботворезы Измельчители пней Уборочный комбайн для виноградников Опрыскиватели для виноградников Прицеп для винограда и транспортное оборудование Пресс для винограда и резервуары Режущее оборудование / инструмент Оборудование для погребов Прочее оборудование для садов и виноградниковХмелевые технологии
Хранение хмеля Сушильная техника Тракторы хмеля Хмелеводства Базовые рамы Гироскопы хмеля Сеялки Круглые бороны Дополнительные резервуары для масла Токарные станки Стабилизаторы Комбинированные инструменты Дисковые плуги Хмелеводческие пресс-подборщики Хмелевые бороны Плуги хмельные дисковые Опрыскиватели Отрывные прицепы Хмелеуборочные машины Рабочие платформыСобирательство
Косилки Роторные грабли / ворошилки Валкообразователи Прицепы для корма / системы силоса Пресс-подборщики Обмотчики тюков Зубья для травы Борона для травы Ролики для травы Ботворезы Дополнительные сеялки Принадлежности / другое лугопастбищное оборудованиеОвощеводство
Узкоколейные тракторы / минитракторы Оборудование для уборки капусты Лукоуборочные комбайны Ботворезы для луковиц Подборщики цветочных луковиц Комбайны для уборки луковиц Морковоуборочный комбайн Прицеп-подборщик Другие комбайны Лопаточные машины Ротор с зубчатым ротором Тубусный культиватор Прочие культиваторы Сеялки Принадлежности / другое оборудование для внесения удобрений Системы полива Насосы для полива Моторы для полива Ирригатор Трубки / шланги Дренажные системы Принадлежности / другие системы полива Оборудование для очистки / обработкиТранспортные средства
Самосвал Chaser Бункер Прицеп-платформа Прицепы-цистерны / системы силоса Прицеп для корма Прицеп для тюков Прицеп для перевозки скота Прицеп-выталкиватель Цистерны для перевозки жидкого навоза Бортовые прицепы Автоцистерны / силосные грузовики Крюковые подъемные системы Легковой прицеп Прицепы для лошадей Грузовые автомобили Автомобили Оси для тележек Принадлежности для транспортных прицепов Прочие прицепыЗерновые бункеры и конвейерные системы
Силосы Зерносушилки Конвейерное оборудование Системы взвешивания зерна Датчик влажности Другие системы хранения / конвейера зернаМини-погрузчики / экскаваторы / штабелеры
Погрузчик с бортовым поворотом Колесный погрузчик Телескопический погрузчик Вилочный погрузчик Экскаваторы Навесное оборудование для фронтальных погрузчиков Навесное оборудование для экскаваторов Вилочный погрузчик Колесная тележка Другие мини-погрузчики / экскаваторы / штабелерыСистемы кормления
Смесители-кормораздатчики Кормораспределители Силосорезки / питатели Краны для сена / экскаваторы для сена Соломоразбрасыватели / измельчители тюков Кормовые бульдозеры Измельчители свеклы Автоматические системы кормления Автоматические кормушки для телят Мобильные кормушки для телят Автоматические кормушки для концентрата Системы измельчения / перемешивания Навесное оборудование для фронтальных погрузчиков Зерноудерживающие Принадлежности / другие системы подачиДоильные установки / автокормушки
Доильные системы Доильный робот Емкости для молока Вакуумный насос Холодильная установка Рекуперация тепла Система очистки Кластеры Дополнительные доильные установки / автоматические кормушкиОборудование для содержания животных / пастбищная техника
Оборудование для содержания крупного рогатого скота Оборудование для содержания свиней Оборудование для содержания птицы Весы для скота Бочки с водой / кормушки для пастбищ Резаки / кормушки для сена Краны для сена / экскаваторы для сена Земляное бурение Другое оборудование для содержания животных / пастбищная техникаДвор / садоводство / мастерская
Газонокосилки / Самоходные газонокосилки Вертикуттер Электропилы Пилы для дров Дровокол Кусторезы Пылесосы / воздуходувки Дробилка Роботизированная газонокосилка Травяная борона Подметальные машины Оборудование для зимнего обслуживания Powe мотыга / двухколесное бурение земли Ранцевые опрыскиватели Квадроциклы / квадроциклы Мойки высокого давления Инструменты Нагреватели Компрессоры Весы для скота Генераторы Взвешивающие мосты Склад Резервуары / Заправочные устройства Другое оборудование для использования во дворе / саду / мастерскойЛесозаготовительная техника
Лесохозяйственные тракторы Харвестеры Форвардеры Форвардеры Транспортные прицепы Навесное оборудование Электропилы Пилы для дров Автоматические колки дров Дровоколы Измельчители пней Дровокол / измельчители веток Tree pl anters Лесохозяйственные лебедки Лесной мульчер Гидравлические кусторезы Прочая лесозаготовительная техникаДомашний скот и лошади
Домашний скот ЛошадиКонный спорт
Конный спортКоммунальная техника
Коммунальные тракторы Тракторы с узкой гусеницей / минитракторы Подметальные машины Оборудование для зимнего обслуживания Береговые косилки Землеройные машины Измельчители пней Сажалки для деревьев Газонокосилки / Самоходные газонокосилки Принадлежности / другая коммунальная техникаВозобновляемые источники энергии
Биогаз Солнечная энергия Другие возобновляемые источники энергии Ветровая энергия Отопление на биомассеСтроительная техника
Экскаваторы Навесное оборудование для экскаваторов Колесный погрузчик Гусеницы Телескопический погрузчик Телескопический колесный погрузчик Самосвал Вилочный погрузчик Дорожные катки Самоходные платформы Бетономешалка Виброплиты Дальнейшее строительство техника Аксессуары и запчасти для строительной техникиУход за землей / зеленью
Уход за землей / зеленью Борона для травыШины / диски / оси
Диски Шины Колеса Резиновые гусеницы ОсиДетали / Компоненты
Сцепные устройства Детали тормозной системы Детали трехточечной навески Электроника и освещение Запчасти для фронтальных погрузчиков Детали привода Отопление, кондиционирование, вентиляция Гидравлика и сцепное устройство Кабины и дополнительное оборудование Кузовные детали Система рулевого управления Детали двигателя Изнашиваемые детали Карданные валы / Карданные валы Разобранные машины / Разборка автомобилей Другие запчасти / комплектующиеРуководства
Руководства оператора Руководства Списки деталей Другие руководстваТракторы и навесное оборудование масштабные
Тракторы и навесное оборудование масштабныеДругое
ДругоеПодержанный bk 28 продам
ВсеТракторы
Tractors Narrow track tractors/compact tractors Forestry tractors Municipal tractors Veteran tractor Unimog ATV/Quads Front-end loader Weights Front loader attachments Rear loaders/transport boxes Tyres Rims Wheels Rubber tracks Axles GPS systems/Precision farming Electronic components Tractor accessories/componentsHarvesters
Combine harvesters Combine/forager headers Self-propelled forage harvesters Trailed/mounted foragers Combine/forager accessories Balers Bale wrappers Forage wagons/silage systems Beet harvesting equipment CCM/cereal mills Cabbage harvesting equipment Onion harvesters Flower bulb toppers Flower bulb lifters Bean pickers Lettuce harvesters Leek harvesters Carrot harvester Pea viners Picking wagon Grape harvester Rubber tracks GPS systems/Precision farming Electronic components Further harvester accessories Further harvestersTillage
Ploughs Cultivator Disc harrows Compact discs Rotary harrows Subsoiler Spade machines Power harrows Rotary grubber Tined rotor Reciprocating harrow Rotor cultivating Seedbed combination Presses Rollers Grass rollers Scrapers Straw harrow Further cultivators Tined weeder/hoeing machineDrills/planters
Drills Precision drills Planters Complementary seeders Accessories/other drills/plantersFertiliser spreaders/sprayers
Fertiliser spreaders Sprayers Accessories/other spreading/syraying equipmentSlurry and manure spreaders
Manure/compost spreaders Further manure/compost spreaders Slurry tankers Self-propelled liquid manure spreader Slurry spreaders Slurry disc harrow Slurry cultivator Slurry injector Slurry disc injector Slurry pumps Slurry mixers Slurry containers Slurry separators Further slurry equipmentIrrigation/drain systems
Irrigation systems Irrigation pumps Irrigation motors Irrigator Tubes/hoses Drainage systems Accessories/other irrigation systemsPotatoes
Potato planters Potato sprayers Potato harvester Potato storage technology/potato processing systems Destoner/bed separator Accessories/other potato equipmentOrchard and Vineyard
Narrow track tractors/compact tractors Rotor cultivating Reciprocating harrow Tined rotor Toppers Stump grinders Grape harvester Vineyard sprayers Grape trailer and transport equipment Grape press and tanks Cutting equipment/tools Cellar equipment Other Orchard and Vineyard equipmentHop technology
Hop storage Drying technology Hop tractors Hop machines Base frames Hop gyroscopes Planter Round harrows Extra oil tanks Cutting lathes Stabilizers Combination tools Disc ploughs Hop balers Hop harrows Hop disc ploughs Sprayers Tear off trailers Hop picking machines Working platformsForaging
Mowers Rotary rakes/tedders Swathers Forage wagons/silage systems Balers Bale wrappers Grass tines Grass harrow Grass rollers Toppers Complementary seeders Accessories/other grassland equipmentVegetable growing
Narrow track tractors/compact tractors Cabbage harvesting equipment Onion harvesters Flower bulb toppers Flower bulb lifters Leek harvesters Carrot harvester Picking wagon Further harvesters Spade machines Tined rotor Tined weeder/hoeing machine Further cultivators Planters Accessories/other spreading/syraying equipment Irrigation systems Irrigation pumps Irrigation motors Irrigator Tubes/hoses Drainage systems Accessories/other irrigation systems Cleaning/processing equipmentTransport vehicles
Tipper Chaser bin Platform trailer Forage wagons/silage systems Forage wagon Livestock trailer Bale transporter push-off-trailer Slurry transport tankers Flatbed trailer Tanker trucks/silo trucks Hook-lift systems Car trailer Horse trailers Truck Motor vehicles Dolly axles Transport trailer accessories Further trailersGrain bins and conveyor systems
Silos Grain dryers Conveying equipment Grain weighing systems Moisture sensor Other grain storage/conveyor systemsSkid-steers/excavators/stackers
Skid-steer loader Wheel loader Telehandler Fork-lift truck Excavators Front loader attachments Excavator attachments Forklift Wheel trolley Further skid-steers/excavators/stackersFeeding systems
Mixer feeders Feed distributor Silage cutters/feeders Hay cranes/Hay excavators Straw blowers/bale splitters Feed dozers Beet choppers Automatic feeding systems Automatic calf feeders Mobile calf feeders Automatic concentrate feeders Feed troughs Milling/mixing systems Front loader attachments Grain crushers Accessories/other feeding systemsMilking installations/automatic feeders
Milking systems Milking robot Milk tanks Vacuum pump Refrigerating plant Heat recycling Cleansing system Clusters Further milking installations/automatic feedersLivestock housing equipment/pasture technology
Cattle housing equipment Pig housing equipment Poultry housing equipment Livestock scales Water drums/pasture water troughs Silage cutters/feeders Hay cranes/Hay excavators earth drilling Other livestock housing equipment/pasture technologyYard/horticulture/workshop
Lawn mowers/Ride-on lawn mowers Verticutter Power saws Firewood saws Wood splitter Brushcutters Vacs/blowers Chipper Robotic lawn mower Grass harrow Sweeping machines Winter service equipment Power hoe/two-wheel earth drilling Knapsack sprayers ATV/Quads Pressure washer Tools Heater Compressors Livestock scales Generators Weigh bridges Warehouse Tank facilities/Filling devices Other equipment for use around yard/garden/workshopForestry machinery
Forestry tractors Harvesters Forwarders Forwarders Haulage trailers Attachments Power saws Firewood saws Automatic firewood choppers Wood splitter Stump grinders Wood splitter/wood chipper Tree planters Forestry winches Forestry mulcher Hydraulic hedge cutters Further forestry equipmentLivestock and horses
Livestock HorsesEquestrian
EquestrianMunicipal vehicles
Municipal tractors Narrow track tractors/compact tractors Sweeping machines Winter service equipment Bank mowers Ditchers Stump grinders Tree planters Lawn mowers/Ride-on lawn mowers Accessories/other municipal machineryRenewable energy sources
Biogas Solar energy Other renewable energy sources Wind energy Biomass heatingConstruction machinery
Excavators Excavator attachments Wheel loader Tracks Telehandler Tele wheel loader Dumper Fork-lift truck Self-propelled platforms Road rollers Concrete mixer Vibrating plates Further construction machinery Construction machinery accessories/spare partsGround/greens care
Ground/greens care Grass harrowTyres/rims/axles
Rims Tyres Wheels Rubber tracks AxlesParts/Components
Hitches Brake parts 3 point hitch parts Electronics & Lights Front loader spare parts Gear parts Heating, air conditioning, ventilation Hydraulics & linkage Cabs & accessories Body parts Steering system Engine parts Wear parts PTO shafts/Cardan shafts Dismantled machines/Disassembly vehicles Other spare parts/componentsManuals
Operator’s manuals Manuals Parts lists Further manualsScale model tractors/implements
Scale model tractors/implementsOther
OtherEurope PMC
Abstract
Cell therapy represents a promising new paradigm for treatment of heart disease, a major cause of death in the industrialized world.Недавнее открытие тканевых резидентных клеток-предшественников c-Kit + (CPC) стимулировало научные усилия по использованию этих клеток в терапевтических целях для регенеративных вмешательств, и первичная культура кардиомиоцитов является распространенной моделью in vitro для исследования основных молекулярных механизмов, лежащих в основе сердечной дегенерации. и регенерация. Текущие протоколы выделения кардиомиоцитов часто приводят к низкому выходу клеток и недостаточному истощению фибробластов, которые затем разрастаются кардиомиоцитами в культуре.В этом протоколе мы описываем улучшенный метод выделения кардиомиоцитов новорожденных крыс, который также обеспечивает повышенный выход CPC. Щадящие методы ферментативной и механической обработки тканей обеспечивают высокое количество клеток и их жизнеспособность, а последующее центрифугирование в градиенте плотности Перколла минимизирует количество фибробластов. Мы сравнили преимущества различных ферментов и обнаружили, что коллагеназа 2 сама по себе приводит к очень высокому выходу кардиомиоцитов, тогда как применение ферментной смеси Matrase ™ увеличивает относительный выход c-Kit + CPC до 35%.Кардиомиоциты и CPC, выделенные с помощью этого протокола, могут представлять собой важный источник клеток для исследования сердечных заболеваний, а также терапевтических подходов на основе клеток.
Ключевые слова: Выделение клеток, кардиомиоциты, кардиальные клетки-предшественники, стволовые клетки, c-Kit, центрифугирование в градиенте плотности
Введение
Ишемическая болезнь сердца и сердечная недостаточность остаются одними из основных причин заболеваемости и смертности в промышленно развитых странах [ 1]. Сердце считалось постмитотическим органом без какой-либо регенеративной способности [2], чему способствовало представление о том, что кардиомиоциты выходят из клеточного цикла и окончательно дифференцируются вскоре после рождения [3,4].Однако эта парадигматическая точка зрения была значительно изменена многочисленными исследованиями, демонстрирующими существование резидентных в сердце клеток-предшественников (CPCs) [5-7], которые дают начало новым кардиомиоцитам и способствуют постоянному клеточному обновлению во взрослом сердце [8-10]. С момента их первоначального открытия различные популяции CPC были охарактеризованы на основе образования кардиосферы [11] или экспрессии рецепторной тирозинкиназы c-Kit (CD117) [12,13], антигена 1 стволовых клеток (Sca1) [14] или Островок-1 [15].Детальный анализ картирования генов недавно показал разные уровни сердечной приверженности в каждой индивидуальной популяции, указывая на то, что они могут представлять разные состояния одной и той же клетки-предшественника [16]. В то время как Sca1 + и клетки, происходящие из кардиосферы (CDC) демонстрируют профиль транскрипции ближе к кардиомиоцитам, клетки c-Kit +, по-видимому, являются наиболее примитивными и недифференцированными [17]. Эти c-Kit + CPC играют решающую роль в эндогенном восстановлении сердца [18] и демонстрируют способность восстанавливать хорошо дифференцированный миокард в ишемизированном сердце [12], что подогревает научный интерес к дальнейшему изучению их регенеративного потенциала и применимости для терапевтических вмешательств. .Культуры кардиомиоцитов и c-Kit + CPC, полученные путем выделения из сердечной ткани, служат широко используемыми моделями in vitro . Однако, несмотря на то, что исследования кардиомиоцитов проводились в течение почти четырех десятилетий [19], остаются проблемы в отношении первичной изоляции этих клеток. После ферментативной и механической диссоциации сердечной ткани критическим этапом процедуры изоляции является отделение кардиомиоцитов от неконтрактильных стромальных клеток сердца, таких как фибробласты, гладкие мышцы и эндотелиальные клетки.Фибробласты быстро размножаются и доминируют в этих культурах, влияя на фенотип и функцию кардиомиоцитов [20,21]. Широко используемые коммерчески доступные наборы для выделения кардиомиоцитов [22,23] не позволяют эффективно решить эту проблему разделения фибробластов, и соответствующие результаты отдельных протоколов изоляции заметно различаются [24].
Что касается изоляции CPC, то стандартизованный метод еще не установлен. В предыдущих исследованиях использовались стандартные протоколы ферментативной диссоциации сердечной ткани с последующей сортировкой популяции клеток c-Kit +.Однако выход клеток c-Kit +, полученных этими методами, варьируется и может быть довольно низким [5,13,25].
Целью этого исследования было разработать улучшенный протокол для выделения первичных клеток из сердечной ткани, который обеспечивает высокий выход, чистоту и жизнеспособность изолированных кардиомиоцитов со специфическим обогащением популяции c-Kit + CPC.
Материалы и методы
Образцы тканей
Сердечная ткань была получена из сердец 1-2-дневных детенышей крыс Sprague-Dawley.Животных анестезировали углекислым газом и умерщвляли смещением шейного отдела позвоночника. Сердечки удаляли и промывали ледяным PBS (Invitrogen, Carlsbad, CA). Сердечную ткань измельчали на кусочки размером примерно 1 мм 3 и снова промывали холодным PBS.
Препарат фермента
Буфер для диссоциации Matrase ™
1 флакон смеси ферментов Matrase ™ (InGeneron Inc., Хьюстон, Техас), содержащий среднюю активность фермента 100 ЕД, ресуспендировали в 10 мл холодной стерильной воды.Этот раствор фермента разбавляли до 250 мл холодным стерильным лактатом Рингера, в результате чего средняя концентрация активности в буфере для диссоциации составляла 0,4 Ед / мл.
Буфер диссоциации коллагеназы
Для получения 2% исходного раствора 1 г коллагеназы 2 (Worthington Biochemical Corp., Лейквуд, штат Нью-Джерси) растворяли в 50 мл стерильного раствора Рингера с лактатом. 3 мл этого исходного раствора разводили до 100 мл стерильным лактатом Рингера для достижения конечной концентрации 0.12% (эквивалент 0,372 Ед / мл) в буфере для диссоциации.
Выделение кардиомиоцитов и CPC
Выбор фермента, используемого для обработки ткани, был сделан в зависимости от последующего использования клеток. Мы выбрали буфер диссоциации коллагеназы для получения большого количества кардиомиоцитов, тогда как буфер диссоциации Matrase ™ использовали для максимизации удельного выхода клеток c-Kit +.
Измельченную сердечную ткань ресуспендировали в соответствующем ферментном буфере и обрабатывали в течение 15 минут в предварительно нагретом блоке обработки ткани ARC ® (InGeneron Inc.). Ферментный буфер, теперь содержащий изолированные клетки, собирали, переносили в свежую пробирку и активность фермента прекращали добавлением холодной лошадиной сыворотки. К оставшимся кусочкам ткани добавляли свежий буфер для диссоциации и этап обработки повторяли до 9 раз до полного растворения фрагментов ткани. Суспензии клеток из всех пробирок для сбора были объединены, центрифугированы в течение 10 мин при 350 × g и полученный осадок клеток ресуспендировали в холодном растворе ADS (ddH 2 O с добавлением NaCl, HEPES, NaH 2 PO 4 , Глюкоза, KCl, MgSO 4 , Феноловый красный).
Центрифугирование в градиенте плотности Percoll
Был сформирован двухслойный градиент плотности, состоящий из окрашенного в красный цвет 63% раствора Percoll под прозрачным 40,5% раствором Percoll (GE-Healthcare, Упсала, Швеция). Суспензию клеток наслаивали поверх градиента, и пробирки центрифугировали при 1400 × g и 4 ° C в течение 30 минут, используя стандартные условия ускорения и скорость замедления 0. Кардиомиоциты и CPC впоследствии можно было удалить из вновь образованного слоя между слоями. Растворы Перколла (полоса 2).Стромальные клетки, включая фибробласты, уравновешиваются на поверхности прозрачного раствора Перколла (полоса 1) и собираются отдельно. Собранный материал объединяли, разбавляли 1: 4 в ADS и центрифугировали при 620 × g и 4 ° C в течение 5 минут. Осадок клеток ресуспендировали в среде для роста кардиомиоцитов (DMEM-F12 с добавлением 1% пенициллина / стрептомицина, 10% лошадиной сыворотки, NaHCO 3 , BSA, пируват натрия, D-глюкоза, аскорбиновая кислота, линолевая кислота, трансферрин, HEPES, Селенит натрия).
Культура клеток
Подсчитывали общее количество выделенных клеток и оценивали их жизнеспособность с помощью окрашивания трипановым синим.Клетки высевали с плотностью 125000 жизнеспособных клеток на см 2 на покрытые желатином многолуночные планшеты и помещали в увлажненный инкубатор при 37 ° C и 5% CO 2 . Культуры оставляли в покое на 24 часа, а последующие смены сред выполняли каждые 48 часов. Фильмы культивированных кардиомиоцитов записывали с помощью цифровой камеры, подключенной к микроскопу Zeiss Axiovert S100 (Zeiss, Оберкохен, Германия).
Проточный цитометрический анализ
Проточный цитометрический анализ выполняли сразу после выделения клеток, а также через 1, 4 и 7 дней культивирования.Используемые антитела представляли собой моноклональный мышиный IgM против α-актина (Santa Cruz Biotechnologies, Санта-Крус, Калифорния, каталожный номер sc-58670), моноклональный мышиный IgG1 против β-актина (Invitrogen, Карлсбад, Калифорния, номер по каталогу AM4302). , AlexaFluor488-конъюгированные поликлональные ослиные антимышиные IgG (Invitrogen, номер по каталогу A-21202), DyLight594-конъюгированные поликлональные козьи антимышиные IgM (Abcam, Кембридж, Массачусетс, номер по каталогу ab97009) и FITC-конъюгированные моноклональные антивирусные антитела. -CD117 IgG мыши (Millipore, Temecula, CA, номер по каталогу MAB1162F). Вкратце, 5 × 10 5 клеток собирали и промывали в проточном буфере (PBS + 10% FBS + 1% азид натрия).Прямое внеклеточное окрашивание CD117 (c-Kit) выполняли с использованием соответствующего разведения первичного антитела, конъюгированного с флуоресценцией, в проточном буфере. Затем клетки фиксировали в 100% метаноле и инкубировали в буфере для пермеабилизации (PBS + 0,5% Triton X-100). Для внутриклеточного непрямого совместного окрашивания клетки окрашивали первичным антителом в блокирующем растворе (PBS + 0,1% BSA + 0,2% Triton X-100 + 0,05% Tween-20 + 10% козьей сыворотки) и промывали PBS / T (PBS + 0,1% Тритона) перед инкубацией в соответствующем разведении флуоресцентных вторичных антител.Анализ выполняли с помощью проточного цитометра FACSCalibur (BD Bioscience, Сан-Диего, Калифорния) и программного обеспечения FlowJo (Tree Star, Ashland, OR).
Иммунофлуоресцентное окрашивание
Иммунофлуоресцентное окрашивание проводили через 4 дня культивирования с использованием следующих антител: моноклональные мышиные IgM против α-актина (Santa Cruz Biotechnologies, Санта-Крус, Калифорния, каталожный номер sc-58670), анти-β-актин моноклональные мышиные IgG1 (Invitrogen, Carlsbad, CA, номер по каталогу AM4302), поликлональные ослиные антимышиные IgG, конъюгированные с AlexaFluor 488 (Invitrogen, cat.нет. A-21202) и DyLight 594-конъюгированный поликлональный козий антимышиный IgM (Abcam, Кембридж, Массачусетс, каталожный номер ab97009). Вкратце, клетки фиксировали 4% параформальдегидом (Sigma-Aldrich, Сент-Луис, Миссури) и повышали проницаемость (PBS + 0,5% Triton X-100). После инкубации в блокирующем растворе проводили внутриклеточное окрашивание с соответствующим разведением первичных антител в течение ночи. Затем клетки промывали иммунофлуоресцентным буфером (PBS + 0,1% BSA + 0,2% Triton X-100 + 0,05% Tween-20) и инкубировали в соответствующем разведении соответствующих вторичных антител, конъюгированных с флуорофором.Ядра клеток контрастировали с помощью DAPI (Invitrogen) и последующий анализ выполняли под микроскопом Axiovert S100 с использованием программного обеспечения Nikon NIS Elements (Nikon Instruments Inc., Токио, Япония).
Анализ данных
Анализы проводились в трех независимых группах экспериментов. Представленные данные выражены в виде средних значений ± стандартное отклонение. Статистическая значимость различий между группами определялась с помощью теста Стьюдента t . Статистически значимым считался уровень p ≤ 0,05, уровень p ≤ 0.01 считался очень значимым.
Результаты
Рабочий процесс
иллюстрирует рабочий процесс этого протокола. Обычная процедура выделения кардиомиоцитов включает ферментативную и механическую диссоциацию сердечной ткани с последующей стадией очистки для уменьшения загрязнения сердечными стромальными клетками. Этот протокол включает методы из предыдущих исследований [26–29] с несколькими существенными модификациями. Мы разработали два варианта процедуры выделения с использованием либо коллагеназы 2 (Worthington Biochemical Corp.) или смесь ферментов Matrase ™ (InGeneron Inc.) для начальной диссоциации тканей. Инкубацию и механическое перемешивание проводили в блоке обработки ткани ARC ™ (InGeneron Inc.), устройстве, специально разработанном для выделения первичных клеток, которое обеспечивает оптимальные условия для ферментативной диссоциации ткани (приложение, рис. 1). Затем использовали центрифугирование в градиенте плотности Перколла. Чтобы объективно оценить преимущества этого протокола, мы сравнили его с результатами, полученными с широко используемым коммерчески доступным набором для изоляции (Система изоляции кардиомиоцитов новорожденных крыс, Worthington Biochemical Corp.) [22,23].
Рабочий процесс процедуры изоляции.
Коллагеназа 2 и Matrase ™ обеспечивают более высокую жизнеспособность и чистоту выделенных клеток
В трех независимых сериях экспериментов для выделения клеток использовали три помета (равных 36 сердцам) 1-2-дневных крыс Sprague-Dawley. давая в среднем 1,0 ± 0,2 × 10 6 клеток на сердце. Окрашивание трипановым синим выявило ~ 90% жизнеспособных клеток после диссоциации с помощью коллагеназы 2 или Matrase ™. Для сравнения, ткань сердца, обработанная с помощью системы изоляции Уортингтона, имела тенденцию давать только около 80% жизнеспособных клеток (p = 0.1719 и p = 0,0941) (). Чтобы оценить эффективность разделения стромальных клеток, клетки, извлеченные из центрифугирования в градиенте плотности Перколла, немедленно анализировали с помощью проточной цитометрии на экспрессию α-актина. A-актин является структурным белком миоцитов, и антитела, используемые для окрашивания, рекомендуются специально для обнаружения клеток сердечной мышцы.
Чистота и жизнеспособность выделенной популяции клеток при сравнении различных методов выделения. (A) Жизнеспособность клеток оценивали сразу после выделения путем окрашивания трипановым синим.Анализ проводился в трех независимых сериях экспериментов. Данные представляют собой процент жизнеспособных клеток по отношению к общему количеству клеток. (B) Свежевыделенные клетки фиксировали, пермеабилизировали и метили флуоресцентным антителом DyLight 594 против кардиоспецифичного α-актина. Для сравнения чистоты выделенной популяции кардиомиоцитов был проведен проточный цитометрический анализ. Серая гистограмма представляет собой немаркированный элемент управления.
Продукт выделения Worthington выявил негомогенную популяцию клеток со средней и высокой экспрессией α-актина; Коллагеназа 2 и Matrase ™ давали преимущественно клетки с высоким содержанием α-актина, что указывает на значительно более чистую изоляцию кардиомиоцитов ().
Клеточные культуры кардиомиоцитов гомогенные и функционально неповрежденные
Центрифугирование в градиенте плотности Перколла обычно приводит к типичному внешнему виду центрифужной пробирки (слева). Клетки из двух вновь образованных слоев (полоса 1 и полоса 2) между растворами Перколла собирали отдельно и культивировали в обычных условиях роста кардиомиоцитов (см. Методы). Морфологическое исследование культур выявляет различные фенотипы клеток (справа). Популяция клеток, собранная из полосы 1, преимущественно содержит фибробласты в форме веретена и не проявляет способности к сокращению (приложение к видео 1).Клетки, собранные из полосы 2, демонстрируют типичную морфологию кардиомиоцитов в форме стержня, демонстрируя спонтанные ритмические сокращения. Они достигают слияния и электрической синхронизации через 2–4 дня культивирования (Дополнение к видео 2).
(A) Морфологическая характеристика клеток, полученных после центрифугирования в градиенте Перколла. Клетки, собранные из вновь образованных полос 1 и 2, культивировали отдельно в условиях роста кардиомиоцитов. Изображения в светлом поле, сделанные через 4 дня, показывают преимущественно фибробластоподобную морфологию во фракции стромальных клеток, собранных с полосы 1.Клетки, собранные из полосы 2, развивают типичный фенотип кардиомиоцитов в форме стержня и демонстрируют ритмическую электрическую активность (соответствующие видеоролики можно найти в дополнительном материале (Дополнительные видеоролики 2, 3)). (B) Чистота кардиомиоцитов в культуре. Клетки помещали на предметные стекла с 8-луночными камерами и проводили иммуноокрашивание через 4 дня культивирования. Одновременная экспрессия кардиомиоцит-специфичного α-актина (красный) и повсеместного маркера β-актина (зеленый) почти во всех клетках выявляет гомогенную культуру кардиомиоцитов.Ядра контрастировали с DAPI. Масштабная шкала соответствует 100 мкм.
Иммунофлуоресценцию проводили через 4 дня культивирования. Совместное мечение повсеместного структурного маркера β-actin и кардиоспецифического актина выявляет одновременную экспрессию почти во всех клетках (19). Эти данные показывают, что стромальные клетки были успешно разделены центрифугированием в градиенте плотности Перколла, что привело к образованию гомогенной и функционально интактной культуры кардиомиоцитов.
Выделение с использованием Matrase ™ дает большое количество c-Kit + клеток
C-Kit рецепторной тирозинкиназы (CD117) является широко признанным маркером сердечных клеток-предшественников (CPC) [12,13,17,18].Для оценки выхода c-Kit + клеток, полученных в обоих вариантах этого протокола выделения, сразу после выделения клеток проводили проточно-цитометрический анализ. Репрезентативные результаты показывают существование двух популяций клеток, характеризующихся низким по сравнению с высоким уровнем экспрессии c-Kit (). В клеточном продукте, полученном в результате выделения с помощью коллагеназы 2, клетки с высокой экспрессией c-Kit составляют 9,45% по сравнению с 35,8% в изоляте, обработанном с помощью Matrase ™ ().
Количественный анализ клеток c-Kit +. (A) Свежевыделенные клетки окрашивали на c-Kit и α-актин и анализировали проточной цитометрией. Экспрессия C-Kit более чем в 3 раза выше в клеточном изоляте после ферментативной диссоциации с использованием Matrase ™. Серая гистограмма представляет собой немаркированный элемент управления. (B) Совместное окрашивание с α-актином выявляет различные популяции внутри изолята клеток. C-Kit low / α-actin high Клетки считаются кардиомиоцитами и представляют наибольшую фракцию клеток в обоих продуктах выделения.Популяция клеток c-Kit high показывает более низкое содержание α-актина и значительно выше после обработки ткани с помощью Matrase ™. (C) В трех сериях экспериментов клетки, полученные в результате первичного выделения, культивировали в условиях роста кардиомиоцитов и анализировали на экспрессию c-Kit через 1, 4 и 7 дней. Постоянное увеличение c-Kit + клеток указывает на стабильную экспрессию c-Kit- и поддержание CPC в культуре.
Совместное окрашивание c-Kit и кардиомиоцит-специфичного α-актина облегчает дальнейшую характеристику изолированных клеток ().В обоих вариантах протокола доминирующая клеточная фракция характеризуется высокими уровнями α-актина и низкой экспрессией c-Kit-, что указывает на то, что это структурно зрелые кардиомиоциты. Отдельная вторая популяция показывает более низкое присутствие α-актина, но высокую экспрессию c-Kit, что позволяет предположить, что они представляют собой c-Kit + CPC. После диссоциации ткани с использованием коллагеназы 2 эти клетки c-Kit high / α-Actin low составляют 7,79% продукта выделения; диссоциация тканей с помощью Matrase ™ привела к 30 популяциям.2% c-Kit high / α-Actin low клеток.
Экспрессия c-Kit сохраняется в культуре
Кардиомиоциты и CPC, полученные в результате первичной изоляции, культивировали в обычных условиях роста кардиомиоцитов (см. Методы) и собирали в разные моменты времени (день 1, 3 и 7) для количественного анализа проточной цитометрией. . Результаты показывают, что количество клеток c-Kit + в культуре постепенно увеличивается с 6,8 ± 1,62 × 10 4 (день 1) до 10,7 × 10 4 ± 1.45 (день 2, p = 0,0545) до 22,4 ± 2,87 × 10 4 клеток / лунку (день 7, p = 0,0039), что предполагает постоянную пролиферативную способность и стабильную экспрессию c-Kit в популяции CPC ().
Обсуждение
В этом исследовании представлен улучшенный метод выделения кардиомиоцитов и c-Kit + CPC из сердец новорожденных крыс. Два варианта протокола, которые мы представляем здесь, отличаются только ферментом, используемым для начальной диссоциации ткани, и обеспечивают индивидуальные преимущества. Наши результаты показывают, что использование коллагеназы 2 дает большее количество жизнеспособных и чистых кардиомиоцитов, в то время как ферментативная диссоциация с помощью Matrase ™ значительно увеличивает выход c-Kit + CPC.
Выделение кардиомиоцитов
Обзор существующих методов выделения кардиомиоцитов новорожденных (таблица дополнений 1) иллюстрирует ключевые преимущества этого протокола, на которые указывают числа выхода, жизнеспособность и чистота конечного клеточного продукта. Общий выход кардиомиоцитов, достигнутый с помощью ранее опубликованных методов, колеблется от 25 000 до 37 000 клеток на сердце или не указан [24, 27–31]. Жизнеспособность изолированных клеток составляет 70–90%, в то время как чистота популяции кардиомиоцитов в большинстве случаев не определяется количественно.Используя коллагеназу 2 для обработки тканей, мы получаем гомогенную популяцию кардиомиоцитов с жизнеспособностью 85–90% и средним выходом более 1 × 10 6 клеток на сердце. Эти результаты можно отнести к нескольким улучшениям, касающимся важнейших этапов процедуры изоляции. Большинство протоколов используют трипсин в сочетании с коллагеназой для ферментативной диссоциации тканей. Мы обнаружили, что коллагеназа 2 сама по себе, применяемая в последовательные короткие периоды времени, предлагает более щадящий способ обработки сердечной ткани (данные не показаны).Этот этап диссоциации был дополнительно оптимизирован за счет использования блока обработки ткани ARC ® вместо обычного орбитального встряхивающего устройства для механического перемешивания. Блок обработки ткани ARC ® , который был специально разработан для процедур выделения первичных клеток, использует центробежное перемешивание и контроль температуры для обеспечения оптимального перемешивания и эффективности ферментативной диссоциации ткани. Было предложено несколько подходов к минимизации контаминации стромальных клеток в культурах кардиомиоцитов.Широко используемый метод предварительного посева [32], который разделяет клетки на основе различных свойств прикрепления, удаляет только 50–80% некардиомиоцитов [29], а также использование ингибиторов пролиферации, таких как Митомицин C [23], Ara C [33] или BrdU [34] ограничено из-за общей клеточной токсичности этих компонентов. Сравнивая различные процедуры очистки, мы обнаружили, что центрифугирование в градиенте плотности является наименее вредным и наиболее эффективным методом разделения клеток (данные не показаны). Поэтому мы оптимизировали ранее опубликованные методы с использованием прерывистого градиента Перколла [35] для применения в нашем собственном протоколе.
Выделение c-Kit + CPC
Поскольку впервые были предложены резидентные в сердце клетки c-Kit + в качестве потенциальных медиаторов восстановления сердца, интерес и исследования в этой области быстро расширились. В большинстве предыдущих исследований выполнялась обычная ферментативная диссоциация сердечной ткани с последующей сортировкой популяции клеток c-Kit + с использованием либо FACS (сортировка клеток с активацией флуоресценции), либо MACS (сортировка клеток с магнитной активацией). Процент клеток c-Kit +, полученных этими методами, составляет от 0.7–24% [5,12,13,25,36].
В представленном протоколе с использованием Matrase ™ мы получили до 35% клеток c-Kit + среди клеточного изолята, что устраняет необходимость в дальнейшем обогащении. Это заметное увеличение может быть связано с несколькими существенными различиями в экспериментальных методах и условиях. Во-первых, источник ткани сердца, используемый для выделения клеток, может иметь значительное влияние на ожидаемый выход клеток c-Kit +. В то время как в большинстве исследований используется сердечная ткань взрослых [5,13,16,25], в этом протоколе клетки были выделены из сердца новорожденных, где количество клеток-предшественников предположительно выше [36–38].Кроме того, мы не удаляли предсердия до диссоциации ткани, как это часто рекомендуется в протоколах выделения кардиомиоцитов [24,29,39], поскольку сообщалось, что CPC накапливаются особенно в правом предсердии [25,37]. Другим существенным отличием является добавление стадии очистки перед количественным определением отдельных популяций клеток. В большинстве упомянутых выше исследований процент клеток c-Kit + относится к общему количеству клеток, выделенных из сердечной ткани. Центрифугирование в градиенте плотности, реализованное в этом протоколе априори обогащает конкретную популяцию клеток, в которой относительная доля клеток-предшественников, следовательно, может быть разумно выше.
Тучные клетки сердца также экспрессируют рецептор c-Kit. Хотя недавние исследования сообщают, что контаминация тучными клетками на самом деле относительно низка после диссоциации сердечной ткани [13,37], это все же следует рассматривать в контексте большого количества клеток c-Kit + в свежем клеточном изоляте. Однако тучные клетки обычно не прилипают и требуют особых условий для поддержания в культуре [40]. Постоянно высокое количество клеток c-Kit +, наблюдаемое в условиях культивирования, как описано здесь (), поэтому является аргументом против значительного загрязнения тучными клетками в изоляте первичных клеток.
3-кратное увеличение выхода клеток c-Kit + при использовании Matrase ™ по сравнению с коллагеназой 2 в идентичном протоколе выделения, скорее всего, может быть приписано различным свойствам фермента. Matrase ™ представляет собой смесь высокоочищенных и охарактеризованных рекомбинантных ферментных препаратов, содержащих различные типы коллагеназы, а также протеазы. Специально разработанный для отделения стволовых клеток от матрикса соединительной ткани [41], он предположительно может усилить изоляцию CPCs из их ниш в сердечной ткани.По сравнению с другими исследованиями, в которых используются коллагеназа [5,13,16], трипсин [36] или диспаза [25], эта смесь ферментов, вероятно, способствует заметно более высокому выходу клеток c-Kit + в этом протоколе.
Что касается их многообещающего регенеративного потенциала, возникает вопрос, жизнеспособны ли изолированные CPC в условиях in vivo . В предыдущих исследованиях с использованием аналогичного метода выделения (устройство обработки ткани ARC ® и смесь ферментов Matrase ™) было обнаружено, что жизнеспособность клеток ткани животных [42] и человека [43] составляет около 90%.Кроме того, было показано, что эти клетки человеческого происхождения способны выживать и пролиферировать in vivo [44]. Однако применимость представленного метода выделения в сердечной ткани человека, а также жизнеспособность изолированных CPC в условиях in vivo остаются вопросами, которые должны быть рассмотрены в будущих исследованиях.
CPC — надежды и перспективы
Среди различных стволовых клеток и клеток-предшественников, исследованных в этом контексте, c-Kit + CPC оказались наиболее мощными промоторами регенерации сердца [45,46].Основываясь на успешном применении на животных моделях, в 2009 году было начато первое на людях исследование SCIPIO для изучения эффектов внутрикоронарной инфузии аутологичных стволовых клеток у пациентов с сердечной недостаточностью после инфаркта миокарда [47].